人類p100蛋白對HeLa細胞周期的影響及其機制研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學博士學位論文人類p100蛋白對HeLa細胞周期的影響及其機制研究姓名：何津巖申請學位級別：博士專業(yè)：免疫學指導教師：姚智20080501天津醫(yī)科火學博士學位論文I)，分別于釋放后不同時間點收取細胞，PI染色，行流式細胞術(shù)檢測細胞周期分布情況。實驗二使用MTS法p100蛋白對HeLa細胞體外增殖能力的影晌。實驗三，探討p100蛋白與細胞周期相關(guān)蛋白的關(guān)系。從啟動子芯片以及基因表達譜芯片的結(jié)果中挑選出兩個蛋白作為研究對象叫hkl

2、及CDKN2C(p18)，分別采用Westernblotting和RealtimePCR法，以pactin和GAPDH為內(nèi)參，觀察比較在p100過表達和抑制表達的情況下，CDKN2C和Chkl的蛋白水平和rnRNA水平有何差異。結(jié)果：第一部分，啟動子芯片提示，p100蛋白可與幾個細胞周期相關(guān)基因(如Chkl，CDKN2A，E2F1，RB等)的啟動子具有較高的結(jié)合親和力。第二部分研究中構(gòu)建了能表達siRNA的重組表達質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染HeLa細胞

3、后，經(jīng)G418篩選出抑制p100蛋白表達的穩(wěn)定細胞株HeLap100I，Westernblotting鑒定瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定株之p100蛋白表達抑制率分別為4759％和6286％。第三部分實驗一結(jié)果表明，p100蛋白對HeLa細胞周期有影響：p100蛋白過表達或抑制表達時均使HeLa細胞周期G1期細胞比例增加，G2期和S期細胞比例減少。實驗二結(jié)果顯示，當p100蛋白過表達時促進HeLa細胞增殖；在瞬時抑制p100蛋白表達時則抑制細胞增殖。實

4、驗三結(jié)果顯示：在HeLa細胞中，①p100蛋白下調(diào)CDKN2C(p18)蛋白表達：瞬時或穩(wěn)定抑制p100蛋白表達均可顯著提高CDKN2C(p18)的蛋白水平和mRNA水平。而p100蛋白過表達時CDKN2C(p18)的蛋白水平降低。②p100蛋白上調(diào)Chkl蛋白表達：當p100蛋白過表達時，Chkl蛋白水平升高；反之，亦然。結(jié)論：1p100蛋白與HeLa細胞周期相關(guān)，鑒于p100蛋白過表達或抑制表達均使HeLa細胞Gl期比例增加，故認為