大鼠自身免疫性心肌炎Toll樣受體9的表達及慢病毒介導Fgl2基因沉默干預作用的研究.pdf

1、目的：本實驗目的在于建立自身免疫大鼠心肌炎模型以及Fgl2慢病毒介導基因沉默干預的大鼠模型。探討toll樣受體9（TLR9）在自身免疫性大鼠心肌炎中的表達情況，以及以慢病毒介導的人纖維介素2（Fgl2）作為治療靶點，進一步明確對自身免疫性大鼠心肌炎治療的可行性及其相關(guān)機制。
　　方法：Fgl2RNAi慢病毒的包裝及制備。選擇購買6周左右Lewis雄性大鼠32只，其中選擇正常大鼠8只（NC組），其余剩下的大鼠在第1天以及第8天分別注

2、射豬心肌球蛋白，從而建立實驗性自身免疫性心肌炎的大鼠模型，建模成功以后隨機地分為3組：心肌炎組（EAM組）、GFP空載體干擾組（GFP組）和Fgl2慢病毒干擾組（RNAi組）。之后分別在免疫第0天、初次免疫后第21天觀察各組大鼠的心臟超聲心動圖；然后再分別隨機地處死第一次免疫后21天以及40天各組大鼠，每組4只，取出組織以用于檢測相關(guān)指標。大鼠心肌組織做HE染色，觀察各組大鼠心肌的炎癥情況，用間接ELISA的方法檢測血清中IL-6、IN

3、F-α及NF-κB炎癥因子的水平，通過流式細胞儀檢測各組大鼠血清中的CD4+CD25+T細胞百分比，應用RT-PCR法分別檢測大鼠心肌組織中的TLR9以及共刺激分子CLTA-4的mRNA地表達情況，用Western Blot法檢測TLR9及Fgl2蛋白在大鼠心肌組織中的表達情況。
　　結(jié)果：大鼠心臟超聲檢查結(jié)果顯示，初次免疫后21dEAM組的心功能較NC組明顯降低（P<0.05），RNAi組較EAM組心功能好轉(zhuǎn)（P<0.05），E

4、AM組與GFP組無差異。血清學檢查顯示EAM組大鼠血清INF-α及NF-κB水平在急性期達到高峰（初次免疫后21d），血清中的IL-6水平在慢性期（免疫后第40d）達到高峰，明顯比其他各組增高（P<0.05），RNAi組相比于EAM組炎癥因子水平有所降低（P<0.05），EAM組與GFP組無差異。初次免疫后的第21d，EAM組的心肌炎癥評分、TLR9蛋白以及mRNA地表達量等均較其他各組增高（P<0.05），RNAi組較EAM組炎癥評分

5、以及TLR9的蛋白表達量減少（P<0.05），EAM組與GFP組無差異。初次免疫后的第21d的大鼠血清中CD4+、CD25+及CD4+CD25+T細胞百分比在各組之間比較，無明顯差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：實驗性自身免疫性心肌炎大鼠心臟TLR9蛋白和mRNA表達上調(diào)，慢病毒介導Fgl2基因沉默可以下調(diào)TLR9蛋白表達，使TLR9蛋白和mRNA表達下降，從而使大鼠心肌炎癥減輕，提示TLR9信號通路可能參與了實驗性自身免疫性心肌