Fgl2基因過表達(dá)對(duì)自身免疫性心肌炎大鼠心功能及相關(guān)炎癥因子影響的研究.pdf

1、目的:
　　本研究旨在建立慢病毒介導(dǎo)凝血酶原(Fibrinogen-like protein2,Fgl2)基因過表達(dá)自身免疫性心肌炎大鼠模型。探討Fgl2基因過表達(dá)對(duì)自身免疫性心肌炎大鼠心功能及相關(guān)炎癥因子水平的影響。
　　方法:
　　雄性Lewis大鼠32只,體重190-210g,隨機(jī)分為4組。①Fgl2慢病毒過表達(dá)自身免疫性心肌炎組8只:對(duì)大鼠誘導(dǎo)免疫性心肌炎模型的同一天,以5x107IU/只的量尾靜脈注射Fgl2

2、過表達(dá)慢病毒載體。②空載體(GFP)自身免疫性心肌炎組8只:對(duì)大鼠誘導(dǎo)免疫性心肌炎模型的同一天,以5x107IU/只的量尾靜脈注射GFP慢病毒載體。③自身免疫性心肌炎組8只。④正常組8只。自然光照,普通飼料喂養(yǎng),自由進(jìn)水。第60天,將大鼠先剃去胸部鼠毛后麻醉,麻醉后檢測(cè)大鼠的左室短軸縮短率(LVFS),然后計(jì)算其左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF),記錄其心率(HR)。處死老鼠后開胸,提取右房靜脈血,分離血清,用于檢測(cè)血清腦鈉肽、腫瘤壞死因子α、白

3、細(xì)胞介素6、白細(xì)胞介素17(BNP、TNF-α、IL-6、IL-17)。取出心臟,使用生理鹽水進(jìn)行沖洗;水平面切開,將心臟分為心房及心室兩部分,其中心底部分進(jìn)行甲醛固定,切片,進(jìn)行HE染色后觀察其病理形態(tài),心室部分進(jìn)行冰凍切片,熒光顯微鏡下觀察帶熒光病毒轉(zhuǎn)染情況,提取心肌組織總蛋白,Werstern blot檢測(cè)Fgl2蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)自身免疫性心肌炎組與正常組大鼠組的飲食飲水量和活動(dòng)量對(duì)比,其飲食量和飲水

4、量明顯減少;
　　(2)熒光顯微鏡檢測(cè):Fgl2基因過表達(dá)自身免疫性心肌炎組,熒光顯微鏡下觀察血管壁及心肌細(xì)胞間血管內(nèi)壁可見綠色熒光;
　　(3)熒光定量PCR檢測(cè)Fgl2基因mRNA表達(dá)情況,可發(fā)現(xiàn)Fgl2基因過表達(dá)自身免疫性心肌炎組高于其他3組,而空載體自身免疫性心肌炎組和自身免疫性心肌炎組兩者之間無明顯差異,但高于正常對(duì)照組;
　　(4)Western blot檢測(cè)Fgl2目的基因蛋白表達(dá):對(duì)比于正常組相比,自身

5、免疫性心肌炎組與GFP空載體組Fgl2蛋白表達(dá)高于正常組,但兩組之間無明顯差異;Fgl2基因過表達(dá)自身免疫性心肌炎組較自身免疫性心肌炎組Fgl2蛋白表達(dá)更高;
　　(5)心肌切片HE染色:在光鏡下正常組大鼠心肌細(xì)胞的胞體,胞核大小一致,胞漿染色均勻,其心肌纖維走行整齊;自身免疫性心肌炎及空載體自身免疫性心肌炎組表現(xiàn)為心內(nèi)膜下小灶性壞死;Fgl2過表達(dá)自身免疫性心肌炎組可見左右心室外膜大面積壞死,室間膈廣泛性心肌壞死,纖維細(xì)胞增生,

6、可見大量中性粒細(xì)胞、噬酸性細(xì)胞;
　　(6)大鼠心功能檢測(cè):對(duì)比于正常組,Fgl2基因過表達(dá)自身免疫性心肌炎組的LVFS、LVEF及HR均降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Fgl2基因過表達(dá)自身免疫性心肌炎組與自身免疫性心肌炎組比較LVEF、LVFS更低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);空載體自身免疫性心肌炎組和自身免疫性心肌炎組LVFS、LVEF及HR的結(jié)果相似,因此無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論: