Fgl2基因過表達對自身免疫性心肌炎大鼠心功能及相關炎癥因子影響的研究.pdf

1、目的:
　　本研究旨在建立慢病毒介導凝血酶原(Fibrinogen-like protein2,Fgl2)基因過表達自身免疫性心肌炎大鼠模型。探討Fgl2基因過表達對自身免疫性心肌炎大鼠心功能及相關炎癥因子水平的影響。
　　方法:
　　雄性Lewis大鼠32只,體重190-210g,隨機分為4組。①Fgl2慢病毒過表達自身免疫性心肌炎組8只:對大鼠誘導免疫性心肌炎模型的同一天,以5x107IU/只的量尾靜脈注射Fgl2

2、過表達慢病毒載體。②空載體(GFP)自身免疫性心肌炎組8只:對大鼠誘導免疫性心肌炎模型的同一天,以5x107IU/只的量尾靜脈注射GFP慢病毒載體。③自身免疫性心肌炎組8只。④正常組8只。自然光照,普通飼料喂養(yǎng),自由進水。第60天,將大鼠先剃去胸部鼠毛后麻醉,麻醉后檢測大鼠的左室短軸縮短率(LVFS),然后計算其左室射血分數(shù)(LVEF),記錄其心率(HR)。處死老鼠后開胸,提取右房靜脈血,分離血清,用于檢測血清腦鈉肽、腫瘤壞死因子α、白

3、細胞介素6、白細胞介素17(BNP、TNF-α、IL-6、IL-17)。取出心臟,使用生理鹽水進行沖洗;水平面切開,將心臟分為心房及心室兩部分,其中心底部分進行甲醛固定,切片,進行HE染色后觀察其病理形態(tài),心室部分進行冰凍切片,熒光顯微鏡下觀察帶熒光病毒轉染情況,提取心肌組織總蛋白,Werstern blot檢測Fgl2蛋白表達。
　　結果:
　　(1)自身免疫性心肌炎組與正常組大鼠組的飲食飲水量和活動量對比,其飲食量和飲水

4、量明顯減少;
　　(2)熒光顯微鏡檢測:Fgl2基因過表達自身免疫性心肌炎組,熒光顯微鏡下觀察血管壁及心肌細胞間血管內壁可見綠色熒光;
　　(3)熒光定量PCR檢測Fgl2基因mRNA表達情況,可發(fā)現(xiàn)Fgl2基因過表達自身免疫性心肌炎組高于其他3組,而空載體自身免疫性心肌炎組和自身免疫性心肌炎組兩者之間無明顯差異,但高于正常對照組;
　　(4)Western blot檢測Fgl2目的基因蛋白表達:對比于正常組相比,自身

5、免疫性心肌炎組與GFP空載體組Fgl2蛋白表達高于正常組,但兩組之間無明顯差異;Fgl2基因過表達自身免疫性心肌炎組較自身免疫性心肌炎組Fgl2蛋白表達更高;
　　(5)心肌切片HE染色:在光鏡下正常組大鼠心肌細胞的胞體,胞核大小一致,胞漿染色均勻,其心肌纖維走行整齊;自身免疫性心肌炎及空載體自身免疫性心肌炎組表現(xiàn)為心內膜下小灶性壞死;Fgl2過表達自身免疫性心肌炎組可見左右心室外膜大面積壞死,室間膈廣泛性心肌壞死,纖維細胞增生,

6、可見大量中性粒細胞、噬酸性細胞;
　　(6)大鼠心功能檢測:對比于正常組,Fgl2基因過表達自身免疫性心肌炎組的LVFS、LVEF及HR均降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);Fgl2基因過表達自身免疫性心肌炎組與自身免疫性心肌炎組比較LVEF、LVFS更低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);空載體自身免疫性心肌炎組和自身免疫性心肌炎組LVFS、LVEF及HR的結果相似,因此無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結論: