紡織品中分散染料的檢測研究和代謝組學(xué)預(yù)測吉非替尼對非小細(xì)胞肺癌療效的探究.pdf

1、第一部分:紡織品中十七種分散染料的檢測研究
　　紡織品與人類生活息息相關(guān)，其中的致敏分散染料的使用不當(dāng)勢必會影響身體健康。本課題利用新型的檢測手段超高效合相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法對紡織品常用的17種致敏分散染料進(jìn)行檢測分析，主要做了以下研究內(nèi)容:
　　1.實驗應(yīng)用超高效合相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法(UPC2-TQMS)，建立了紡織品中十七種致敏分散染料—分散橙1，分散黃39，分散橙37，分散橙3，分散藍(lán)124，分散黃9，分散

2、黃49，分散紅1，分散黃3，分散藍(lán)3，分散紅11，分散藍(lán)106，分散紅17，分散棕1，分散藍(lán)102，分散黃1，分散藍(lán)1的分析方法。實驗以超聲萃取為樣品前處理手段，考察了固定相、柱溫、背壓等儀器條件對分離度的影響，最終采用Waters ACQUITY UPC2TM BEH(1.7μm，3×100 mm I.D.)色譜柱進(jìn)行分離，柱溫45℃，背壓1600 psi，流動相為CO2(A)和甲醇(B)，流速2 mL·min-1，流出時間5 min

3、，通過質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM），得到樣品的定量限為0.1～2.0μg·mL-1，檢出限是0.02～1.0μg·mL-1，線性相關(guān)系數(shù)大于0.99，加標(biāo)回收率是70.55～103.03％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)小于9％(n=5)，方法重現(xiàn)性較好且用于實際樣品檢測。
　　2-考察了BEH、BEH2-Ethyl-pyridine、HSS C18 SB以及CSHFluorophenyl四種色譜柱對不同基團(tuán)的分散染料的分離檢測情況。結(jié)果

4、表明，對于HSS C18 SB柱，樣品整體保留時間延長。含有蒽醌結(jié)構(gòu)的染料在CSH Fluorophenyl中出峰較晚，該固定相對含有芳香結(jié)構(gòu)順反異構(gòu)體具有很好的選擇性及分離度。這部分內(nèi)容提供了含有偶氮、蒽醌、苯胺、羥基類的物質(zhì)用于四種固定相適用性的參考依據(jù)。
　　第二部分:代謝組學(xué)方法預(yù)測吉非替尼對非小細(xì)胞肺癌患者療效的探究
　　吉非替尼作為治療非小細(xì)胞肺癌的主要藥物之一有較好的治療效果，同時價格不菲。但吉非替尼并不是對所

5、有非小細(xì)胞肺癌患者都有療效，尋找有效的生物標(biāo)志物預(yù)測服用吉非替尼肺癌患者的治療效果具有重要意義，不僅可以降低病人的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，而且還幫助醫(yī)生選擇正確有效的治療方案。本實驗運(yùn)用超高效液相色譜-高分辨飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UHPLC-QTOFMS)對134個生存時間不同的肺癌患者的血清進(jìn)行分析，結(jié)合統(tǒng)計學(xué)軟件對結(jié)果進(jìn)行代謝組學(xué)研究。主要內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　1.利用甲醇溶劑對134個非小細(xì)胞肺癌患者的血清進(jìn)行沉淀蛋白前處理，樣品用UHP

6、LC-QTOFMS上機(jī)檢測。具體分析條件如下:色譜柱是Waters ACQUITY UHPLCTM BEH C18(1.7μm，2.1×100 mmI.D.)，柱溫45℃，流動相由甲醇(A)-0.2％甲酸的水溶液(B)組成，流速0.35 mL·min-1，樣品洗脫時間為22 min。134個血清樣品連續(xù)進(jìn)樣，并采集電噴霧電離源(ESI)的正、負(fù)模式下的樣品信息，最終獲得代謝指紋圖譜。
　　2.通過Markerlynx V4.1軟件

7、將圖譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)為三維矩陣，進(jìn)行峰對齊、峰匹配以及歸一化，導(dǎo)入SIMCA-P軟件中進(jìn)行偏最小二乘-判別分析，通過SPSS軟件進(jìn)行Kaplan-Meier生存時間分析，Log rank檢驗，并運(yùn)用COX回歸模型進(jìn)行多因素分析，最終找出22個重要的差異代謝物，從中進(jìn)一步篩選出2種潛在代謝物。
　　3.通過飛行時間質(zhì)譜獲得的精確分子質(zhì)量，以及二極質(zhì)譜碎片斷裂分析，在HMDB數(shù)據(jù)庫中找到匹配代謝物信息，從而推斷標(biāo)志物，初步解釋可能的生物學(xué)意義