調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植對腦梗死大鼠的保護(hù)作用及抗炎機制.pdf

1、目的：①探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells)靜脈輸注移植對大鼠腦梗死的免疫調(diào)節(jié)腦保護(hù)作用。②研究CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植后腦梗死大鼠血漿炎性細(xì)胞因子的變化，以及對中樞炎性細(xì)胞浸潤的影響，并探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在腦梗死炎癥反應(yīng)發(fā)生發(fā)展中的作用機制。
　　 方法：⑴免疫磁珠兩步法提取健康成年Sprague-Dawley(SD)大鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。線栓法

2、制備大鼠大腦中動脈阻塞模型，缺血2h再灌注。將健康成年雄性SD大鼠隨機分為正常組，假手術(shù)對照組，腦梗死組，腦梗死組分為靜脈輸注PBS治療組，靜脈輸注脾細(xì)胞(spleen cells，SP)治療組和靜脈輸注調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)治療組。分別于術(shù)后24h和72h對各組進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評價，并在72h進(jìn)行TTC染色，計算機圖像分析系統(tǒng)測量腦梗死體積。⑵選用健康成年雄性SD大鼠，線栓法制備大鼠大腦中動脈阻塞模型，缺血2h再灌注。將動物隨機分為

3、正常組，假手術(shù)對照組，腦梗死組，腦梗死組分為靜脈輸注PBS治療組，靜脈輸注脾細(xì)胞治療組和靜脈輸注調(diào)節(jié)性T細(xì)胞治療組三個亞組。各組動物于治療72h后斷頭取腦制備腦組織石蠟切片，免疫組織化學(xué)方法染色檢測中性粒細(xì)胞在腦組織中的分布。生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELlSA)測定血漿細(xì)胞粘附分子ICAM-1和炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ、TGF-β表達(dá)水平的變化。
　　 結(jié)果：①除正常組、假手術(shù)

4、對照組外，其余各組動物均于術(shù)后出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能缺損，尤以腦梗死后靜脈輸注PBS治療組和腦梗死后靜脈輸注脾細(xì)胞治療組最為嚴(yán)重，腦梗死后靜脈輸注調(diào)節(jié)性T細(xì)胞治療組顯著減輕。Tregs組24h，72h Zea Longa評分都顯著低于PBS和脾細(xì)胞組(P<0.01)。24h，72h前肢放置實驗Tregs組與前兩組比較都顯著減小(P<0.01)。24h，72h NSS評分Tregs組也顯著低于PBS和脾細(xì)胞組(P<0.01)。腦梗死后72

5、h梗死體積百分比Tregs組(27.13％)顯著低于PBS(42.82％)和脾細(xì)胞組(40.85％)，具有顯著差異(P<0.001)。②與正常對照組和假手術(shù)組相比，腦梗死組粘附分子ICAM-1和促炎性細(xì)胞因子明顯升高(P<0.05)；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞治療組與PBS治療組和脾細(xì)胞治療組比較，血漿促炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ的水平顯著降低(P<0.001)，抗炎性細(xì)胞因子IL-10和TGF-β調(diào)節(jié)性T細(xì)胞治療組與P

6、BS治療組和脾細(xì)胞治療組相比顯著降低(P<0.001)。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞治療組細(xì)胞粘附分子ICAM-1和中樞中性粒細(xì)胞浸潤與PBS治療組和脾細(xì)胞治療組相比顯著降低，具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　 結(jié)論：⑴CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞靜脈輸注移植顯著減小大鼠腦梗死體積并促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)。⑵CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植能夠降低腦梗死大鼠血漿細(xì)胞粘附分子ICAM-1和炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、I