β1，4半乳糖基轉移酶V與星型膠質細胞瘤惡性表型關系的研究.pdf

1、βl，4-半乳糖基轉移酶V(GaITV)是βl，4-半乳糖基轉移酶(βl,4-Gait)家族成員之一。在以往的研究中發(fā)現(xiàn)，GaITV的表達水平與膠質瘤的惡性程度呈正相關。在星型膠質細胞瘤SHG44細胞中，過表達GaITV可以加快細胞生長速率，增加細胞在軟瓊脂上的集落形成數(shù)，促進了SHG44細胞的惡性程度。同時，大量的研究己表明，由細胞表面黏附分子——整合素(integrin)介導的細胞黏附、遷移能力的變化與腫瘤細胞的惡性表型密切相關。

2、 整合素integrin由α和β亞基組成。β1亞基是一個N一糖基化蛋白，其糖鏈的修飾是依次在內質網和高爾基體中進行的，在糖鏈的加工過程中，形成了分布于胞內的未成熟型(105kD)和定位于細胞膜的成熟型(125kD)integrinD1亞基。我們發(fā)現(xiàn)，與對照相比，在轉染反義GaitV的SHG44細胞中(GaitV-AS／SHG44)，細胞表面integrinβ1明顯增多，同時伴隨有105kD型式的integrinβ1減少，125kD

3、型式的integrinβ1增多；通過糖苷內切酶EndoH消化實驗，我們進一步確證了105kD型式的integirnβl是糖鏈修飾不完全的未成熟型；在GaITV-AS／SHG44細胞中，integrinβ1除了與高爾基體共定位外，還呈簇狀分布于胞內接近細胞膜的位置。這一結果表明，下調GaITV的表達，可以干涉integrinβl的糖基化修飾過程，影響了integrinpl的成熟及細胞膜轉運。與之相應，進一步研究表明，隨著細胞表面integ

4、rinp1的減少，integrinβ1和α5的相互作用和integrin下游信號分子粘著斑激酶FAK的磷酸化水平都降低，進而導致GaITV-AS／SHG44細胞在Fn上的黏附能力增強、遷移能力下降。 為了研究GaITV在腦星型膠質瘤中的特異性轉錄調控機制，我們構建了一系列GaITV啟動子區(qū)的缺失突變體。我們發(fā)現(xiàn)，-200～+120啟動子區(qū)域對維持GaITV在SHG44細胞中的轉錄至關重要，并且這一啟動子區(qū)域在SHG44細胞中的轉

5、錄活性相對較高。對這一區(qū)域的分析表明，其中有轉錄因子E1AF的結合序列。進一步研究發(fā)現(xiàn)，E1AF在SHG44細胞中高表達，并能夠促進GaITV-200～+120啟動子區(qū)域的轉錄活性。 綜上所述，我們認為腦星型膠質瘤SHG44細胞通過特異性表達轉錄因子E1AF，促進了GaITV的轉錄，進而影響了integrinβl的成熟與細胞膜定位，改變了細胞對Fn的黏附、遷移能力。 吡咯喹呤醌(pyrroloquinolinequino