VEGFC信號(hào)通路參與Maspin調(diào)控絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲的研究.pdf

1、第一部分缺氧對(duì)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株VEGFC表達(dá)的影響
　　目的：研究二氯化鈷（CoCl2）缺氧條件下絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞 VEGFC表達(dá)情況，探討缺氧對(duì)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞VEGFC表達(dá)的影響，并分析VEGFC與Maspin表達(dá)間的相關(guān)性。
　　方法：
　　1.采用二氯化鈷（CoCl2）構(gòu)建人早孕絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株（TEV-1）化學(xué)缺氧模型。2.采用熒光定量 PCR法及 Western Blot法分別檢測(cè)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株 VEGFC

2、mRNA及蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.熒光定量PCR結(jié)果顯示缺氧24小時(shí)，絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株VEGFC mRNA表達(dá)明顯升高，是正常對(duì)照組的2.7倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.Western Blot結(jié)果顯示缺氧24小時(shí)，絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株VEGFC蛋白量明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：缺氧可以使絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株中Maspin表達(dá)明顯增高，同時(shí)VEGFC的表達(dá)也相應(yīng)升高，兩者之間的變化趨勢(shì)

3、基本一致。因此推測(cè) VEGFC可能參與了maspin對(duì)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞的調(diào)控。
　　第二部分重組人Maspin蛋白對(duì)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株VEGFC表達(dá)的影響
　　目的：研究常氧及缺氧時(shí)重組人Maspin蛋白對(duì)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株VEGFC表達(dá)的影響，探討Maspin蛋白對(duì)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株VEGFC表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　方法：
　　1.采用二氯化鈷（CoCl2）構(gòu)建絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株化學(xué)缺氧模型。
　　2.常氧及缺氧條件

4、下，利用不同濃度重組人Maspin蛋白干預(yù)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞。
　　3.采用熒光定量 PCR法 Western Blot法分別檢測(cè)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株 VEGFC mRNA及蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.在常氧條件下，重組人Maspin蛋白干預(yù)24小時(shí)以后，隨著蛋白濃度的增加絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株 VEGFC表達(dá)明顯升高，干預(yù)48小時(shí)以后絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株VEGFC的表達(dá)未見(jiàn)明顯變化。
　　2.在缺氧條件下，重組人Mas

5、pin蛋白干預(yù)24小時(shí)后隨著蛋白濃度的升高絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株VEGFC的表達(dá)量反而逐漸降低，在48小時(shí)以后VEGFC的表達(dá)明顯降低。
　　結(jié)論：在常氧條件下重組人Maspin蛋白上調(diào)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株VEGFC的表達(dá)，在缺氧條件下重組人Maspin蛋白下調(diào)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株VEGFC的表達(dá)。
　　第三部分脫甲基化藥物對(duì)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株VEGFC表達(dá)的影響
　　目的：研究脫甲基化藥物在常氧及缺氧條件下對(duì)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株 VEG

6、FC表達(dá)的影響，探討脫甲基化藥物對(duì)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株VEGFC表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　方法：
　　1.采用二氯化鈷（CoCl2）構(gòu)建絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株化學(xué)缺氧模型。
　　2.在常氧及缺氧條件下，利用不同濃度的脫甲基化藥物干預(yù)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株。
　　3.采用熒光定量 PCR法及 Western Blot法分別檢測(cè)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株 VEGFC mRNA及蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.在常氧條件下脫甲基化

7、藥物干預(yù)24小時(shí)和48小時(shí)后，絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株VEGFC的表達(dá)量隨著脫甲基化藥物濃度的增加，出現(xiàn)先升高后降低的變化，峰值分別是正常對(duì)照的5.6倍和2.6倍，都是在藥物濃度為1.0μmol/L時(shí)出現(xiàn)。2.在缺氧條件下脫甲基化藥物干預(yù)24小時(shí)和48小時(shí)后，絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株VEGFC的表達(dá)量變化隨著脫甲基化藥物濃度的增加，出現(xiàn)先升高后降低的變化，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：脫甲基化藥物5-氮雜-2′-脫氧胞苷可以使絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株

8、VEGFC的表達(dá)增加，這一效應(yīng)是呈劑量依賴性的。而缺氧可以抑制5-氮雜-2′-脫氧胞苷對(duì)VEGFC表達(dá)的促進(jìn)作用。
　　第四部分重組人VEGFC蛋白對(duì)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株遷移與侵襲能力的影響
　　目的：研究常氧及缺氧條件下重組人VEGFC蛋白干預(yù)后的絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株遷移與侵襲能力變化，探討重組人VEGFC蛋白對(duì)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株遷移與侵襲的調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　方法：
　　1.采用二氯化鈷（CoCl2）構(gòu)建絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株化

9、學(xué)缺氧模型。
　　2.在常氧及缺氧條件下，利用不同濃度的重組人VEGFC蛋白干預(yù)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株。
　　3.利用Transwell細(xì)胞遷移與侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株遷移與侵襲能力的變化。
　　結(jié)果：
　　1.在常氧條件下隨著重組人VEGFC蛋白濃度升高絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株的遷移與侵襲能力逐漸增加。
　　2.在缺氧條件下隨著重組人VEGFC蛋白濃度升高絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株的侵襲能力逐漸降低，而遷移能力無(wú)明顯改變。