Sonic hedgehog信號(hào)通路對(duì)胎盤滋養(yǎng)層11β-HSD2表達(dá)調(diào)控.pdf

1、背景和目的:
　　糖皮質(zhì)激素(GCs)對(duì)促進(jìn)胎兒器官的發(fā)育成熟有著重要作用，但孕期過度暴露于糖皮質(zhì)激素，會(huì)導(dǎo)致胎兒生長(zhǎng)發(fā)育遲緩以及成年后代謝性疾病的發(fā)生率增加。11β-羥基類固醇脫氫酶Ⅱ型(11β-HSD2)是一種糖皮質(zhì)激素代謝酶，能將有活性的皮質(zhì)醇代謝為無活性的皮質(zhì)酮，它主要在胎盤的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞中表達(dá)，起著胎盤糖皮質(zhì)激素屏障的作用。Sonic Hedgehog(Shh)信號(hào)通路對(duì)細(xì)胞定向分化具有重要作用，并且作為形態(tài)生成素參與

2、了多臟器組織的發(fā)育，如在胚胎發(fā)育中的四肢和大腦的形成。有研究表明，過量糖皮質(zhì)激素可導(dǎo)致新生胎鼠腦損傷，Shh信號(hào)通路通過11β-HSD2降低糖皮質(zhì)激素引起的新生兒小腦損傷的風(fēng)險(xiǎn)，但Shh只能抑制11β-HSD2敏感的糖皮質(zhì)激素（可的松、皮質(zhì)醇、潑尼松）的活性，這提示我們Shh可能參與11β-HSD2活性調(diào)節(jié)，然而未見Shh調(diào)控11β-HSD2表達(dá)的報(bào)道。因此，本課題主要研究Shh信號(hào)通路對(duì)胎盤11β-HSD2表達(dá)的調(diào)控和分子機(jī)制，為胎兒

3、生長(zhǎng)受限以及胎源性成年疾病的發(fā)生提供新的理論依據(jù)。
　　研究方法:
　　取正常足月妊娠的胎盤組織，即排除孕婦患有妊娠期高血壓、糖尿病、肥胖等，在胎盤娩出后1h內(nèi)取材，通過percoll密度梯度法分離細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞。通過熒光素酶報(bào)道基因檢測(cè)Shh條件培養(yǎng)基的活性;用具有活性的Shh條件性培養(yǎng)基，重組蛋白粉末以及Shh信號(hào)通路的特異性抑制劑環(huán)巴胺，Smo受體激動(dòng)劑Purmorphamine等處理從胎盤中分離出細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞，通過

4、熒光實(shí)時(shí)定量PCR和Western Blotting等實(shí)驗(yàn)手段檢測(cè)11β-HSD2的mRNA及蛋白表達(dá)水平。
　　研究結(jié)果:
　　1.Shh條件培養(yǎng)基活性:Gli-熒光素酶報(bào)道基因結(jié)果顯示，Shh條件性培養(yǎng)基的活性與對(duì)照培養(yǎng)基相比明顯增高;用條件性培養(yǎng)基處理細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞，Gli1的蛋白表達(dá)水平升高。
　　2.Shh信號(hào)通路途徑對(duì)11β-HSD2表達(dá)的作用:Shh促進(jìn)11β-HSD2 mRNA和蛋白水平的表達(dá)，環(huán)巴胺可

5、有效抑制Shh信號(hào)途徑對(duì)11β-HSD2的促進(jìn)作用。Smo受體激動(dòng)劑的濃度為10μM時(shí)，11β-HSD2的mRNA水平和蛋白水平均顯著增加。通過Gli-shRNA敲降細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞中的Gli基因，再用Shh條件培養(yǎng)基處理，與對(duì)照組相比，Gli-shRNA作用后，11β-HSD2的表達(dá)下降。
　　結(jié)論:
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，制備的Shh條件性培養(yǎng)基具有活性; Shh和膜受體蛋白Smo促進(jìn)胎盤11β-HSD2的mRNA及蛋白水平的