HGF-PARp-1信號通路調(diào)控卵巢癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本研究擬通過探討HGF對卵巢癌SKOV-3細(xì)胞中PARP-1表達(dá)水平的影響，以及HGF/PARP-1通路在調(diào)控SKOV-3細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中的作用，旨在為研究卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制及其針對性治療提供新的理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.細(xì)胞培養(yǎng):細(xì)胞分組:(1)正常對照組:RPIM-1640培養(yǎng)液（含10％胎牛血清）進(jìn)行培養(yǎng);(2) HGF刺激組:加入適量重組人HGF，使培養(yǎng)液中HGF最終濃度分別為10ng/mL，

2、20ng/mL，40ng/mL，60ng/mL，80ng/mL;刺激時(shí)間分別為6h，24h，48h。
　　2.Transwell檢測不同濃度HGF對卵巢癌SKOV-3細(xì)胞侵襲力的影響。
　　3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測HGF不同濃度及作用時(shí)間對卵巢癌SKOV-3細(xì)胞PARP-1mRNA的表達(dá)。
　　4.Western-blotting檢測HGF不同濃度及作用時(shí)間對卵巢癌SKOV-3細(xì)胞PARP-1蛋白表達(dá)的影響。

3、　　5.慢病毒轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞及獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株，外源性40ng/mL HGF處理不同轉(zhuǎn)染組細(xì)胞24h，同時(shí)設(shè)置無HGF處理的對照組。實(shí)驗(yàn)分組如下:空白對照組;HGF組;PARP-siRNA組;HGF+PARP-siRNA組;NC-siRNA組;HGF+NC-siRNA組，進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)，以檢測在HGF調(diào)控下，PARP-1對SKOV-3細(xì)胞體外侵襲力的影響。
　　6.RT-PCR檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中PARP-1 mRNA的表達(dá)

4、。
　　7.Western-blotting檢測各組細(xì)胞中PARP-1蛋白的表達(dá)。
　　8.Transwell實(shí)驗(yàn)檢測HGF調(diào)控的不同實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞體外侵襲力的影響。
　　9.ELISA法檢測HGF調(diào)控的SKOV-3細(xì)胞中，PARP-1對細(xì)胞分泌MMP-2含量的影響。
　　結(jié)果：
　　1.HGF可促進(jìn)SKOV-3細(xì)胞的體外侵襲能力。
　　2.HGF可上調(diào)SKOV-3細(xì)胞中PARP-1的表達(dá)。
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