海綿狀靜脈畸形的實驗與臨床研究.pdf

1、海綿狀靜脈畸形源于血管形態(tài)發(fā)生的異常，擴張的靜脈包含薄的血管壁和異常的平滑肌。病變表現(xiàn)為藍色、柔軟、可被壓縮，或可觸及堅硬鈣化的靜脈石。靜脈畸形包括了小范圍局限性的皮膚靜脈畸形以及涉及重要結(jié)構(gòu)的多部位多層次的彌漫性畸形。因靜脈畸形有不斷發(fā)展的特征，使治療尤為困難;隨時間推移，尤其是在青春期，畸形會增大;靜脈畸形治療后容易復發(fā)。經(jīng)皮穿刺硬化療法作為治療靜脈畸形的一線療法，和手術(shù)相比最大的優(yōu)點是沒有外部瘢痕、很少有嚴重并發(fā)癥，一般情況下比切

2、除更安全有效。硬化療法是把組織硬化劑注射到病變處，引起細胞破壞、血栓形成以及強烈的炎癥反應(yīng)，局部纖維化導致病變收縮。75-90％的患者有良好的結(jié)果，包括病變體積的縮小和癥狀的減輕。硬化治療常需持續(xù)多次。
　　 在我國平陽霉素硬化治療靜脈畸形作為一種常規(guī)治療方式，療效確切。為指導應(yīng)用，中華口腔醫(yī)學會口腔頜面外科專業(yè)委員會脈管性疾病學組2011年建議了平陽霉素治療靜脈畸形方法，其中利多卡因作為一種聯(lián)合用藥與平陽霉素配制成一定濃度藥液

3、注入畸形靜脈中。利多卡因一方面作為酰胺類局麻藥物，用于不同部位以阻斷感覺神經(jīng)而產(chǎn)生麻醉，其穿透性和擴散性強。治療靜脈畸形可減輕平陽霉素栓塞過程中因疼痛引起的反射性血管痙攣，使硬化藥物更充分的填塞病灶。另一方面，利多卡因作為鈣調(diào)蛋白阻滯劑對抗腫瘤藥物有增敏作用。
　　 利多卡因、平陽霉素注入到畸形靜脈中對血管內(nèi)皮細胞的作用如何？利多卡因是否在平陽霉素治療靜脈畸形過程中有協(xié)同作用？平陽霉素和利多卡因濃度的改變對臨床治療效果有何影響？

4、
　　 本課題分為兩個部分，第一部分采用昆明小鼠脾臟作為人海綿狀靜脈畸形的動物模型，通過石蠟切片光鏡觀察、超薄切片電鏡觀察、末端轉(zhuǎn)移酶介導的缺口末端標記法(TUNEL法)標記凋亡細胞，Image-ProPlus6.0病理細胞圖像分析系統(tǒng)比較細胞凋亡率，實時熒光定量PCR檢測細胞凋亡因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表達，觀察不同濃度利多卡因、不同濃度平陽霉素在不同時間對脾臟血管內(nèi)皮細胞的毒性作用以及平陽霉素與

5、不同濃度利多卡因聯(lián)合用藥時在不同時間對血管內(nèi)皮細胞的毒性作用，探討利多卡因是否對平陽霉素治療海綿狀靜脈畸形有協(xié)同作用。第二部分回顧性分析平陽霉素聯(lián)合不同濃度利多卡因治療海綿狀靜脈畸形，探討利多卡因濃度對療效的影響;回顧性分析不同濃度平陽霉素治療淺表海綿狀靜脈畸形，探討平陽霉素濃度對治療效果的影響，指導臨床用藥;回顧性分析低濃度平陽霉素治療淺表靜脈畸形，總結(jié)治療效果。
　　 第一部分:利多卡因影響平陽霉素治療海綿狀靜脈畸形的實驗研

6、究
　　 實驗1:不同濃度利多卡因?qū)π∈笃⑴K血管內(nèi)皮細胞的影響
　　 目的:探討利多卡因?qū)ρ軆?nèi)皮細胞的細胞毒性。
　　 方法:將88只雌性昆明小鼠按隨機區(qū)組設(shè)計原則隨機分為4組，其中A組16只，為生理鹽水對照組;實驗組72只，分為B、C、D三組，每組24只，分別為0.1％利多卡因組、0.2％利多卡因組、0.4％利多卡因組。每組又隨機為4個日程組(2、5、8、14d組)，對照組每日程4只，實驗組每日程6只。將小鼠

7、用10％水合氯醛(3ml/kg)腹腔注射麻醉后，常規(guī)消毒、鋪巾。分層切開皮膚、肌層、腹膜，切口長約1.0cm，將胃翻起顯露其背側(cè)的脾臟，鈍性牽拉固定，用4號半針頭沿脾臟長軸方向穿刺，對照組注射生理鹽水0.3ml，實驗組注射不同濃度鹽酸利多卡因溶液0.3ml，邊注射邊勻速退針，稍加壓迫針孔止血，分層縫合，繼續(xù)飼養(yǎng)。術(shù)后第2、5、8、14d處理對照組的4只小鼠，實驗組B、C、D中的各6只小鼠。麻醉后，按照原切口再次開腹，游離并切斷結(jié)扎脾臟周

8、圍血管及系膜，取出脾臟，去除脾臟頭尾，將脾臟中段分割后，分別投入10％中性福爾馬林及2.5％的戊二醛溶液中。HE染色，觀察不同濃度、不同時間標本變化;TUNEL法檢測細胞凋亡，每例標本制切片2張，用Image-ProPlus6.0病理細胞圖像分析系統(tǒng)，將各組TUNEL標記切片進行分析。在400×光鏡下，每張切片隨機選擇6個高倍視野的圖片，分別計數(shù)每張切片中TUNEL陽性細胞比率(=6個高倍視野的陽性細胞數(shù)/細胞總數(shù)×100％)并計算其平

9、均值。電鏡下觀察血管內(nèi)皮細胞變化。
　　 統(tǒng)計方法:正態(tài)分布計量資料采用均數(shù)±標準差(x±S)描述，時間與處理因素的效應(yīng)分析采用析因設(shè)計的方差分析，若交互作用有統(tǒng)計學差異，進一步分析單獨效應(yīng)。滿足正態(tài)且方差齊的數(shù)據(jù)，采用單因素方差分析(One-wayANOVA);非正態(tài)和(或)方差不齊的數(shù)據(jù)，采用Kruskal-WallisH秩和檢驗;若有統(tǒng)計學意義，用SNK法進一步做兩兩比較，P＜0.05為差別有統(tǒng)計學意義，所有數(shù)據(jù)用SPSS

10、16.0分析。
　　 結(jié)果:大體觀察，對照組2、5、8、14天外觀未見明顯改變，均表現(xiàn)為包膜光滑完整，邊緣整齊，無腫脹。各實驗組與對照組比較無明顯差異。
　　 顯微鏡下，生理鹽水組，各時間點為正常脾臟表現(xiàn):脾臟表面被覆薄層纖維組織，其外為單層間皮細胞;其下紅、白髓結(jié)構(gòu)清楚，血竇不擴張，脾竇內(nèi)襯單層內(nèi)皮細胞，內(nèi)皮細胞完整，血竇內(nèi)充以適量的紅細胞，間質(zhì)無炎細胞浸潤，組織細胞不增生;脾小體結(jié)構(gòu)清楚，生發(fā)中心不擴張。0.1％利多

11、卡因組:各時間點與對照組相比無明顯變化。0.2％利多卡因組:2天組，為正常脾臟表現(xiàn);5天組，偶見脾竇出血;8天組，間質(zhì)偶見炎癥細胞浸潤，偶見局部單核或多核巨噬細胞;14天組，間質(zhì)細胞浸潤較8天組稍多，偶見纖維蛋白滲出，偶見吞噬了細胞碎片的多核巨噬細胞。0.4％利多卡因組:2天組，偶見脾竇擴張，充血，紅白髓結(jié)構(gòu)清楚，間質(zhì)偶見炎癥細胞浸潤;5天組，脾竇擴張、充血較明顯，間質(zhì)炎癥細胞浸潤增多;8天組，可見間質(zhì)細胞浸潤，少量纖維蛋白滲出，部分脾

12、索結(jié)構(gòu)略模糊，可見到吞噬了細胞碎片的多核巨噬細胞;14天組，間質(zhì)細胞浸潤、纖維蛋白滲出增多，局部可見到多個吞噬了細胞碎片的多核巨噬細胞。部分紅白髓結(jié)構(gòu)模糊。
　　 透射電鏡觀察:生理鹽水組、0.1％利多卡因組、0.2％利多卡因組各時間點脾臟可見大量紅髓，血竇清晰，細胞連接完好，紅細胞聚于脾竇內(nèi)且數(shù)量較多，淋巴細胞分布均勻，結(jié)構(gòu)完整，細胞器完好，整體無明顯組織學改變。鏡下未見凋亡小體。0.4％利多卡因組2天組、5天組脾臟結(jié)構(gòu)未見明

13、顯改變，8天組、14天組可見脾竇筋膜破壞、可見凋亡小體形成。
　　 血管內(nèi)皮細胞凋亡率進行析因方差分析，不同組間細胞凋亡率比較差異顯著(F組間=107.676，P組間=0.000)，不同時間點細胞凋亡率比較差異顯著(F時間=4.725，P時間=0.005)，時間與組間交互效應(yīng)有顯著性意義(F組間×時間=13.682，P組間×時間=0.000)。
　　 單獨效應(yīng)方差分析結(jié)果表明，生理鹽水組4個時間點凋亡率比較差別無統(tǒng)計學意

14、義(F=0.296，P=0.828)。0.1％利多卡因組采用Kruskal-WallisH秩和檢驗，4個時間點凋亡率比較差別無統(tǒng)計學意義(x2=3.687，P=0.297)。0.2％利多卡因組采用Kruskal-WallisH秩和檢驗，4個時間點凋亡率比較差別無統(tǒng)計學意義(x2=4.167，P=0.244)。0.4％利多卡因組采用Kruskal-WallisH秩和檢驗，4個時間點凋亡率比較差別有統(tǒng)計學意義(x2=19.747，P=0.0

15、00)。其中，14天組＞8天組＞5天組，14天組＞2天組。
　　 單獨效應(yīng)方差分析結(jié)果表明，2天組:各組之間比較差別無統(tǒng)計學意義(F=1.386，P=0.279)。5天組:0.4％利多卡因組凋亡率較其它組升高，采用Kruskal-WallisH秩和檢驗，差別有統(tǒng)計學意義(x2=11.186，P=0.011)。其中，D組＞A組，D組＞B組，D組＞C組。8天組:0.4％利多卡因組凋亡率較其它組升高，采用Kruskal-WallisH

16、秩和檢驗，差別有統(tǒng)計學意義(x2=13.717，P=0.003)。其中D組＞A組，D組＞B組，D組＞C組。14天組:0.4％利多卡因組凋亡率較其它組升高，采用Kruskal-WallisH秩和檢驗，差別有統(tǒng)計學意義(x2=12.753，P=0.005)。其中D組＞A組，D組＞B組，D組＞C組。
　　 結(jié)論:我們的研究表明，利多卡因在0.1％和0.2％的濃度時，小鼠脾臟血管內(nèi)皮細胞未見組織學改變，未引起細胞凋亡。隨著利多卡因干預(yù)濃

17、度的增加、作用時間的延長，利多卡因具有細胞毒性作用，可誘發(fā)細胞的凋亡。利多卡因誘發(fā)小鼠脾臟內(nèi)皮細胞凋亡具有明顯的時間和濃度依賴性。
　　 實驗2:不同濃度平陽霉素對小鼠脾臟血管內(nèi)皮細胞的影響
　　 目的:探討平陽霉素對血管內(nèi)皮細胞的細胞毒性
　　 方法:將88只雌性昆明小鼠按隨機區(qū)組設(shè)計原則隨機分為4組，其中A組16只為生理鹽水對照組;實驗組72只，分為B、C、D三組，每組24只，分別為0.5mg/ml平陽霉素組

18、、1mg/ml平陽霉素組、2mg/ml平陽霉素組。每組又隨機為4個日程組(2、5、8、14d組)，對照組每日程4只，實驗組每日程6只。按照實驗1手術(shù)方法找到小鼠脾臟，用4號半針頭沿脾臟長軸方向穿刺，對照組注射生理鹽水0.3ml，實驗組注射不同濃度平陽霉素溶液0.3ml。術(shù)后處理同實驗1。統(tǒng)計方法同實驗1。
　　 結(jié)果:大體觀察，生理鹽水組:各時間點外觀未見明顯改變。0.5mg/ml平陽霉素組:2天組，脾組織暗紅光亮，未見明顯變化

19、;5天組，個別標本脾組織顏色稍暗，包膜略有緊張;8天組，部分標本脾組織邊緣稍鈍，輕度腫脹;14天組，大部分標本出現(xiàn)脾組織顏色變暗，略凹陷，包膜緊張度消失。1mg/ml平陽霉素組:2天組，部分脾組織包膜略緊張，有輕度腫脹;5天組，脾組織色澤變暗，邊緣稍鈍，有輕度腫脹;8天組，脾組織包膜緊張度消失，部分區(qū)域出現(xiàn)微凹;14天組，部分標本脾組織萎縮，邊緣凹凸不平有切跡，表面白色條紋樣瘢痕，與周圍組織有粘連。2mg/ml平陽霉素:2天組，脾組織包

20、膜緊張，邊緣稍鈍，有不同程度腫脹;5天組，脾組織包膜緊張度消失，顏色變暗，部分區(qū)域出現(xiàn)微凹;8天組，脾組織不同程度萎縮，部分標本出現(xiàn)邊緣切跡，被膜凹凸表現(xiàn)，表面有白色條紋樣瘢痕，與周圍組織有粘連;14天組，大部分標本出現(xiàn)脾臟質(zhì)硬暗紅，包膜凹凸皺縮，表面有白色瘢痕，脾臟邊緣銳利伴有不規(guī)則切跡，與周圍組織嚴重粘連，呈現(xiàn)肉眼可見的明顯萎縮。
　　 顯微鏡下，生理鹽水組:各時間點為正常脾臟表現(xiàn)。0.5mg/ml平陽霉素:2天組，個別脾竇

21、出現(xiàn)擴張，充血，少量炎細胞浸潤;5天組，間質(zhì)炎細胞浸潤，竇內(nèi)皮細胞腫脹，個別出現(xiàn)變性，少量纖維蛋白滲出。8天組，脾竇擴張、充血顯著，竇內(nèi)皮細胞腫脹、變性，部分脾索結(jié)構(gòu)模糊，較多炎細胞浸潤、纖維蛋白滲出及組織細胞增生;14天組:纖維蛋白滲出、變性，纖維組織增生，紅細胞彌散，部分脾竇塌陷毀損，脾小體萎縮形態(tài)不均。1mg/ml平陽霉素:2天組，脾竇出血、擴張，少量炎細胞浸潤，偶見局部多核巨噬細胞;5天組，脾組織充血顯著，脾竇炎細胞浸潤，纖維蛋

22、白沉積，內(nèi)皮細胞腫脹、變性，多核巨噬細胞增多;8天組，脾索結(jié)構(gòu)模糊，纖維蛋白沉積伴有纖維組織的增生，可見新鮮出血;14天組，脾竇塌陷毀損，部分脾小體萎縮、形態(tài)不均，纖維蛋白滲出、變性，纖維組織增生，較多單核或多核巨噬細胞云集。2mg/ml平陽霉素;2天組，脾竇擴張，充血，竇內(nèi)皮細胞腫脹，個別竇內(nèi)皮細胞及脾索纖維細胞變性，或細胞核濃縮、碎裂，脾索結(jié)構(gòu)略模糊，炎細胞浸潤、組織細胞增生;5天組，脾組織充血顯著，較多竇內(nèi)皮細胞及脾索纖維細胞變性

23、，大量細胞核濃縮、碎裂、崩解，較多單核或多核巨噬細胞云集，脾索結(jié)構(gòu)模糊，較多炎細胞浸潤、組織細胞增生;8天組，脾竇塌陷毀損，內(nèi)皮細胞胞核溶解、散碎，大量單核或多核巨噬細胞云集。纖維蛋白滲出、變性，纖維組織增生，紅細胞彌散，部分脾小體萎縮形態(tài)不均，邊緣充血、出血;14天組，脾竇內(nèi)皮細胞凋亡成片，脾小體塌陷萎縮，纖維組織增生，被膜增厚。
　　 電鏡下，對照組各時間表現(xiàn)同實驗1。各實驗組各時間均可見不同程度的血竇壁破壞，線粒體空泡樣變

24、、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，凋亡小體形成。
　　 血管內(nèi)皮細胞凋亡率進行析因方差分析，不同組間細胞凋亡率比較差異顯著(F組間=9549.392，P組間=0.000)，不同時間點細胞凋亡率比較差異顯著(F時間=2499.782，P時間=0.000)，時間與組間交互效應(yīng)有顯著性意義(F組間×時間=279.087，P組間×時間=0.000)。
　　 單獨效應(yīng)方差分析結(jié)果表明，對照組:4個時間點凋亡率比較差別無統(tǒng)計學意義(F=0.296，P=

25、0.828)。0.5mg/ml平陽霉素組:4個時間點凋亡率比較差別有統(tǒng)計學差異(F=1144.825，P=0.000)。14天組＞8天組＞5天組＞2天組。1mg/ml平陽霉素組:4個時間點凋亡率比較差別有統(tǒng)計學意義(F=1494.281，P=0.000)，14天組＞8天組＞5天組＞2天組。2mg/ml平陽霉素組:4個時間點凋亡率比較差別有統(tǒng)計學意義(F=963.028，P=0.000)，14天組＞8天組＞5天組＞2天組。
　　

26、單獨效應(yīng)方差分析結(jié)果表明，2天組:各組之間凋亡率比較差別有統(tǒng)計學意義(F=1232.831，P=0.000)。D組＞C組＞B組＞A組。5天組:各組之間凋亡率比較差別有統(tǒng)計學意義(F=1201.614，P=0.000)。D組＞C組＞B組＞A組。8天組:各組之間凋亡率比較差別有統(tǒng)計學意義(F=2134.600，P=0.000)。D組＞C組＞B組＞A組。14天組:各組之間凋亡率比較差別有統(tǒng)計學意義(F=14886.604，P=0.000)。D

27、組＞C組＞B組＞A組。
　　 結(jié)論:平陽霉素在0.5mg/ml濃度下可引起細胞明顯凋亡，隨藥物濃度增加，作用時間的延長，凋亡細胞增多，染色加深。PYM引起細胞凋亡的程度，具有明顯的濃度和時間依賴性。
　　 實驗3:平陽霉素與不同濃度利多卡因?qū)π∈笃⑴K血管內(nèi)皮細胞的影響
　　 目的:探討利多卡因是否對平陽霉素治療海綿狀靜脈畸形有協(xié)同作用
　　 方法:將88只雌性昆明小鼠按隨機區(qū)組設(shè)計原則隨機分為4組，其中A

28、組16只，為生理鹽水對照組;實驗組72只，分為B、C、D三組，每組24只，分別為0.5mg/ml平陽霉素組、0.5mg/ml平陽霉素+0.1％利多卡因組和0.5mg/ml平陽霉素+0.2％利多卡因組。每組又隨機為4個日程組(2、5、8、14d組)，對照組每日程4只,實驗組每日程6只。按照實驗1手術(shù)方法找到小鼠脾臟，用4號半針頭沿脾臟長軸方向穿刺，對照組注射生理鹽水0.3ml，實驗組注射0.5mg/ml平陽霉素溶液或平陽霉素利多卡因混合液

29、0.3ml。按照實驗1方法在各個時間點取出小鼠脾臟。去除脾臟頭尾，將對照組脾臟中斷分割后，分別投入10％中性福爾馬林及2.5％的戊二醛溶液中;將實驗組脾臟中斷分為三份，一份迅速置入凍存管，放入液氮中凍存;另兩份分別投入10％中性福爾馬林及2.5％的戊二醛溶液中。液氮中凍存組織用于凋亡蛋白Caspase-3的實時熒光定量(RT-PCR)檢測。統(tǒng)計方法同實驗1。
　　 結(jié)果:大體觀察，對照組:2、5、8、14天外觀未見明顯改變。0.

30、5mg/ml平陽霉素組:各時間點外觀同實驗2同等濃度平陽霉素組表現(xiàn)。0.5mg/ml平陽霉素+0.1％利多卡因組:各時間點與0.5mg/ml平陽霉素組相比外觀無明顯變化。0.5mg/ml平陽霉素+0.2％利多卡因組:2天組，脾組織暗紅光亮色，部分標本包膜略緊張，略有輕度腫脹;5天組，脾組織色澤變暗，邊緣稍鈍;8天組，脾組織包膜緊張度消失，顏色變暗，部分區(qū)域出現(xiàn)微凹;14天組，部分標本脾組織萎縮，邊緣凹凸不平有切跡。
　　 顯微鏡

31、下，對照組，各時間點為正常脾臟表現(xiàn)。0.5mg/ml平陽霉素組，各時間點同實驗2同濃度平陽霉素組表現(xiàn)。0.5mg/ml平陽霉素+0.1％利多卡因組，各時間點與0.5mg/ml平陽霉素組相比無明顯變化。0.5mg/ml平陽霉素+0.2％利多卡因組:2天組，部分脾竇出血、擴張，少量炎細胞浸潤，偶見局部多核巨噬細胞;5天組，脾組織充血顯著，脾竇炎細胞浸潤，少量纖維蛋白沉積，內(nèi)皮細胞腫脹、變性，多核巨噬細胞增多;8天組，脾索結(jié)構(gòu)模糊，纖維蛋白沉

32、積伴有纖維組織的增生，可見新鮮出血;14天組:部分脾竇塌陷毀損，部分脾小體萎縮、形態(tài)不均，纖維蛋白滲出、變性、增生，較多單核或多核巨噬細胞云集。
　　 電鏡觀察，對照組各時間表現(xiàn)同實驗1，各實驗組各時間均可見不同程度的血竇壁破壞，線粒體空泡樣變、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，凋亡小體形成。
　　 血管內(nèi)皮細胞凋亡率進行析因方差分析，不同組間細胞凋亡率比較差異顯著(F組間=1510.583，P組間=0.000)，不同時間點細胞凋亡率比較差異

33、顯著(F時間=917.257，P時間=0.000)，時間與組間交互效應(yīng)有顯著性意義(F組間×時間88.540，P組間×時間=0.000)。
　　 單獨效應(yīng)方差分析結(jié)果表明，生理鹽水組4個時間點凋亡率比較差別無統(tǒng)計學意義(F=0.296，P=0.828)。0.5mg/ml平陽霉素組:采用秩和檢驗，4個時間點凋亡率比較差別有統(tǒng)計學意義(x2=21.600，P=0.000)。14天組＞8天組＞5天組＞2天組。0.5mg/ml平陽霉素+

34、0.1％利多卡因組:采用方差分析，4個時間點凋亡率比較差別有統(tǒng)計學差異(F=876.169，P=0.000)。14天組＞8天組＞5天組＞2天組。0.5mg/ml平陽霉素+0.2％利多卡因組:采用方差分析，4個時間點凋亡率比較差別有統(tǒng)計學差異(F=21.600，P=0.000)。14天組＞8天組＞5天組＞2天組。
　　 單獨效應(yīng)方差分析結(jié)果表明，2天組:采用秩和檢驗，各組之間凋亡率比較差別有統(tǒng)計學意義(x2=17.360，P=0.

35、001)。其中，D組＞C組＞A組;D組＞B組＞A組。5天組:采用秩和檢驗，各組之間凋亡率比較差別有統(tǒng)計學意義(x2=17.202，P=0.001)。其中，D組＞C組＞A組;D組＞B組＞A組。8天組:采用秩和檢驗，各組之間凋亡率比較差別有統(tǒng)計學意義(x2=17.715，P=0.001)。其中，D組＞C組＞A組;D組＞B組＞A組。14天組:采用秩和檢驗，各組之間凋亡率比較差別有統(tǒng)計學意義(x2=17.146，P=0.001)。其中，D組＞C

36、組＞A組;D組＞B組＞A組。
　　 各實驗組Caspase-3拷貝數(shù)進行析因方差分析，不同組間Caspase-3拷貝數(shù)比較差異顯著(F組間=9549.392，P組間=0.000)，不同時間點Caspase-3拷貝數(shù)比較差異顯著(F時間=2499.782，P時間=0.000)，時間與組間交互效應(yīng)有顯著性意義(F組間×時間279.087，P組間×時間0.000)。
　　 單獨效應(yīng)方差分析結(jié)果表明，0.5mg/ml平陽霉素組:

37、采用秩和檢驗，4個時間點比較caspase-3拷貝數(shù)差別有統(tǒng)計學意義(x2=21.600，P=0.000)。14天組＞8天組＞5天組＞2天組。0.5mg/ml平陽霉素+0.1％利多卡因組:采用秩和檢驗，4個時間點比較caspase-3拷貝數(shù)差別有統(tǒng)計學意義(x2=21.600，P=0.000)。14天組＞8天組＞5天組＞2天組。0.5mg/ml平陽霉素+0.2％利多卡因組:采用秩和檢驗，4個時間點比較caspase-3拷貝數(shù)差別有統(tǒng)計學

38、意義(x2=21.600，P=0.000)。14天組＞8天組＞5天組＞2天組。
　　 單獨效應(yīng)方差分析結(jié)果表明，2天組:采用秩和檢驗，各組之間比較caspase-3拷貝數(shù)差別有統(tǒng)計學意義(x2=15.158，P=0.001)。D組＞C組＞B組。5天組:采用秩和檢驗，各組之間比較caspase-3拷貝數(shù)差別有統(tǒng)計學意義(x2=11.415，P=0.003)。其中，D組＞C組;D組＞B組。8天組:采用秩和檢驗，各組之間比較caspa

39、se-3拷貝數(shù)差別有統(tǒng)計學意義(x2=11.474，P=0.003)。其中D組＞C組;D組＞B組。14天組:采用方差分析，各組之間比較caspase-3拷貝數(shù)差別有統(tǒng)計學意義(F=127.582，P=0.000)。其中，D組＞C組;D組＞B組。
　　 結(jié)論:0.2％的利多卡因在平陽霉素導致的細胞凋亡中起到協(xié)同作用，并且隨時間延長作用增加。提示利多卡因在配合平陽霉素治療海綿狀靜脈畸形的過程中，不僅是起到封閉和止痛作用，而且對平陽霉

40、素細胞毒性具有協(xié)同作用，且具有濃度及時間依賴性。本實驗數(shù)據(jù)可以假定利多卡因在人體內(nèi)會起到類似的作用。然而，由于動物模型實驗的有限性，盡管觀察了利多卡因?qū)ζ疥柮顾丶毎拘宰饔玫膮f(xié)同作用，對于臨床的真正影響及指導需要進一步的研究。
　　 第二部分:平陽霉素硬化治療海綿狀靜脈畸形的臨床研究
　　 第一節(jié):平陽霉素聯(lián)合不同濃度利多卡因治療海綿狀靜脈畸形的對照研究
　　 目的:比較平陽霉素聯(lián)合不同濃度利多卡因治療海綿狀靜脈

41、畸形的臨床療效，探討利多卡因濃度對治療效果的影響。
　　 方法:自2008年6月～2010年6月，我們采用2mg/ml平陽霉素、2mg/ml平陽霉素聯(lián)合0.5％利多卡因及2mg/ml平陽霉素聯(lián)合1％利多卡因，分別治療海綿狀靜脈畸形各40例。所有患者知情同意。建立患者標準化數(shù)據(jù)收集表格，包括患者年齡、性別、病變部位、大小、病史?？茩z查、注射藥量，治療次數(shù)、臨床反應(yīng)、副作用以及隨訪。患者治療前后拍攝數(shù)碼照片。注射方法:嚴格消毒后，用

42、5號針頭從距病變邊緣0.5cm處正常皮膚處進針，針尖水平穿刺到靜脈畸形處，回抽出血確定注射器刺入的靜脈區(qū)域，緩慢注射至局部腫脹，稍顯蒼白，注意勿使局部注藥后張力過大。對面積稍大的靜脈畸形，一處進針藥液不能浸潤到的部位，可采用多點注射。每次注射的藥液體積是1.5～6.0ml。治療后局部壓迫穿刺點3min以防藥液外溢。根據(jù)病變情況決定治療的次數(shù)，2次治療間隔15d。每次治療后留觀0.5h。三組治療操作均為一人獨立完成。
　　 統(tǒng)計學

43、方法三組性別比較采用卡方檢驗，年齡、病變面積和治療次數(shù)比較采用完全隨機設(shè)計資料的方差分析，三組間的療效比較采用Kruskal-WallisH秩和檢驗，三組間的不良反應(yīng)比較采用卡方檢驗，P＜0.05為差別有統(tǒng)計學意義。所有數(shù)據(jù)用SPSS16.0分析。
　　 結(jié)果:三組患者性別、年齡、病變面積差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。2mg/ml平陽霉素聯(lián)合1％利多卡因治療組的平均治療次數(shù)有降低趨勢，但三組治療次數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P=0

44、.586)。經(jīng)過注射治療后，隨訪12～16個月，均未見有肺纖維化及肝腎功能損害現(xiàn)象，三組間的療效差異無統(tǒng)計學意義(P=0.904)。三組患者治療后病變部位均有不同程度的腫漲和疼痛，在臨床觀察中2mg/ml平陽霉素組疼痛表現(xiàn)程度遠大于另外兩組。各組中均有發(fā)熱、胃腸道反應(yīng)及局部水皰或皮膚潰瘍、壞死發(fā)生。三組不良反應(yīng)差異無統(tǒng)計學意義(P=0.875)。
　　 結(jié)論:利多卡因?qū)ζ疥柮顾刂委熀＞d狀靜脈畸形未表現(xiàn)出協(xié)同作用。
　　

45、第二節(jié):不同濃度平陽霉素治療海綿狀淺表靜脈畸形的對照研究
　　 目的:比較不同濃度平陽霉素治療海綿狀淺表靜脈畸形的臨床療效。
　　 方法:自2008年2月～2010年2月，我們采用低濃度平陽霉素(0.5mg/ml)及常規(guī)濃度平陽霉素(2mg/ml)分別治療體表單發(fā)、局限性海綿狀靜脈畸形各32例。所有患者知情同意。建立患者標準化數(shù)據(jù)收集表格，包括患者年齡、性別、病變部位、大小、病史?？茩z查、注射藥量，治療次數(shù)、臨床反應(yīng)、副

46、作用以及隨訪。常規(guī)消毒后，4號半針頭從距病變邊緣0.5cm處正常皮膚粘膜處進針，回抽出血確定注射器刺入的靜脈區(qū)域，緩慢注射至局部腫脹，稍顯蒼白。對面積稍大的靜脈畸形，一處進針藥液不能浸潤到的部位，可采用多點注射。每次注射的藥液體積是0.7～6.0ml。治療后局部壓迫穿刺點3min以防藥液外溢。根據(jù)病變情況決定治療的次數(shù)，2次治療間隔15d。每次治療后留觀0.5h。兩組治療操作均為一人獨立完成。
　　 統(tǒng)計學方法兩組性別比較采用卡

47、方檢驗，年齡和病變面積比較采用t檢驗，兩組間的療效比較采用Mann-WhitneyU秩和檢驗，兩組間的不良發(fā)應(yīng)采用卡方檢驗，P＜0.05為差別有統(tǒng)計學意義，所有數(shù)據(jù)用SPSS16.0分析。
　　 結(jié)果:兩組患者性別、年齡、病變面積差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。經(jīng)過1～6次注射治療后，隨訪12～16個月，均未見有肺纖維化及肝腎功能損害現(xiàn)象，兩組間的療效差異無統(tǒng)計學意義(P=0.306)。兩組患者治療后病變部位均有不同程度的腫

48、脹和疼痛，在臨床觀察中低濃度組表現(xiàn)程度遠小于正常濃度組。兩組不良反應(yīng)差異無統(tǒng)計學意義(P=0.198)。
　　 結(jié)論:低濃度平陽霉素硬化治療重要功能器官的單發(fā)、局限性淺表靜脈畸形，局部腫脹輕、并發(fā)癥少，安全有效，患者耐受性好，是一種較好的治療方式。
　　 第三節(jié):低濃度平陽霉素聯(lián)合地塞米松硬化治療唇部淺表靜脈畸形
　　 目的:觀察低濃度平陽霉素加地塞米松硬化治療唇部淺表靜脈畸形的臨床療效。
　　 方法:2

49、007年1月～2011年1月，應(yīng)用低濃度平陽霉素(0.5mg/ml)聯(lián)合地塞米松(1mg/ml)硬化治療唇部淺表靜脈畸形患者68例，其中男29例，女39例，年齡13～69歲;病變范圍最小0.5×0.8cm，最大3×2.4cm。根據(jù)病變情況決定治療的次數(shù)，2次治療間隔15d。
　　 結(jié)果:68例患者最少注射2次，最多注射8次，治療后隨訪12～32個月，平均隨訪21個月。患者外觀滿意，沒有復發(fā)傾向。根據(jù)療效評價標準，66例患者治愈，

50、2例患者有效。
　　 結(jié)論:低濃度平陽霉素聯(lián)合地塞米松硬化治療唇部淺表靜脈畸形是安全有效的治療方法。
　　 第四節(jié):低濃度平陽霉素注射治療龜頭部靜脈畸形
　　 目的:探討龜頭部靜脈畸形的治療方法。
　　 方法:對2002年1月～2010年10月收治29例龜頭部靜脈畸形患者，采用低濃度平陽霉素(0.5mg/ml)經(jīng)皮穿刺注射治療病變區(qū)域。年齡16～33歲，龜頭部病變?yōu)樗{色、突起的、不規(guī)則腫物，指壓后可縮小，

51、彩色多普勒超聲檢查證實為血管樣病變，與尿道海綿體或陰莖海綿體之間有清楚的界限。每次治療注射的藥液體積是1～3ml，并在陰莖體部病變區(qū)近心端置于止血帶，自注射時到注射后5分鐘阻斷龜頭部的血液回流，以保持靜脈畸形體內(nèi)的藥物濃度及含量。治療后外用抗生素軟膏，紗布適度加壓包扎。根據(jù)病變情況決定重復治療的次數(shù)，2次治療間隔15天。
　　 結(jié)果:16例患者治療3次，8例4次，5例6次。治療后隨訪12～38個月，平均隨訪時間為18個月。26名