延胡索乙素的立體選擇性代謝及其對肝臟藥物代謝酶的影響.pdf

1、本研究應(yīng)用動物肝微粒體、人肝微粒體、人重組CYP450酶對延胡索乙素(tetrahydropalmatine,THP)對映體的立體選擇性代謝進(jìn)行了研究,確定了主要介導(dǎo)THP對映體立體選擇性代謝的Ⅰ相代謝酶,同時還研究了THP對映體對小鼠肝微粒體中Ⅰ相代謝酶的誘導(dǎo)和抑制作用,以預(yù)測臨床可能發(fā)生的代謝性藥物相互作用。第一章延胡索乙素對映體在不同動物肝微粒體中的立體選擇性代謝目的:考察延胡索乙素(tetrahydropalmatine, TH

2、P)對映體在動物肝微粒體中的立體選擇性代謝,并闡明參與THP對映體立體選擇性代謝的主要CYP450酶亞型。方法:將THP對映體和不同動物的肝微粒體(猴,狗,小鼠,大鼠)進(jìn)行體外共孵育,用反相HPLC法測定孵育體系中左旋延胡索乙素((-)-tetrahydropalmatine,(-)-THP)和右旋延胡索乙素((+)-tetrahydropalmatine,(+)-THP)的濃度變化;測定(-)-THP和(+)-THP在動物肝微粒體中的

3、酶動學(xué)參數(shù)并進(jìn)行比較;考察各種主要CYP450酶抑制劑對大鼠肝微粒體代謝(-)-THP和(+)-THP的影響,以初步確定參與THP代謝的主要CYP450亞型;考察系列濃度的CYP450抑制劑酮康唑(0.1～1μmol/L)和伏氟沙明(2～20μmol/L)對(-)-THP和(+)-THP在地塞米松(dexamethason,Dex)和β-萘黃酮(β-naphthoflavone,β-NF)誘導(dǎo)的大鼠肝微粒體(rat liver micr

4、osomes,RLM)中代謝的影響。結(jié)果:在猴,狗,小鼠,大鼠動物肝微粒體中,(+)-THP的代謝程度均顯著大于(-)-THP(P＜0.05、P＜0.01或P＜0.001);與未經(jīng)藥物誘導(dǎo)的大鼠肝微粒體(RLM)比較,Dex和β-NF誘導(dǎo)的大鼠肝微粒體對(-)-THP和(+)-THP的代謝程度均顯著增加;在Dex誘導(dǎo)的大鼠肝微粒體(Dex-RLM)中,(+)-THP代謝增加的幅度明顯大于(-)-THP,而在β-NF誘導(dǎo)的大鼠肝微粒體(β

5、-NF-RLM)中,(-)-THP和(+)-THP代謝增加的幅度相當(dāng);20μmol/L伏氟沙明和酮康唑?qū)HP對映體在RLM中的代謝存在明顯的抑制作用。猴肝微粒體(MLM)、狗肝微粒體(DLM)、小鼠肝微粒體(mLM)、RLM、Dex-RLM、β-NF-RLM對(-)-THP和(+)-THP的酶動力學(xué)參數(shù)Km值分別為33.88和22.41、63.52和47.75、52.60和31.22、30.39和41.73、31.43和13.31、6

6、.560和20.55μmol/L,Clint值分別為42.99和71.69、7.570和32.07.31.64和90.23.29.01和77.24.107.6和617.2.274.O和222.1μL/min/mg protein;酮康唑和伏氟沙明對(-)-THP和(+)-THP在Dex-RLM和β-NF-RLM的抑制均呈現(xiàn)濃度依賴性,酮康唑在Dex-RLM中的抑制作用強(qiáng)于其在β-NF-RLM中的作用,且其對(+)-THP的抑制作用強(qiáng)于(

7、-)-THP,而伏氟沙明在β-NF-RLM中的抑制作用強(qiáng)于其在Dex-RLM中的作用,且對(-)-THP的抑制作用強(qiáng)于(+)-THP。結(jié)論:各種動物肝微粒體對THP的代謝呈現(xiàn)立體選擇性,對(+)-THP清除率顯著大于(-)-THP;在大鼠肝微粒體中主要由CYP3A1/2和CYP1A2參與THP對映體代謝,其中CYP3A1/2對(+)-THP有較好的選擇性,而CYP1A2對(-)-THP有較好的選擇性。目的:考察THP對映體在人體外代謝模

8、型中的立體選擇性代謝,并闡明主要參與THP對映體立體選擇性代謝的CYP450酶亞型及其作用。方法:用混合的正常人肝微粒體(mixed human liver microsomes, mixed-HLM)、CYP1A2高活性的單個人肝微粒體(IANO human liver microsomes,IANO-HLM)、重組人CYP3A4和CYP1A2(recombinant CYP3A4,rCYP3A4和recombinant CYP1A2

9、,rCYP1A2)和THP對映體進(jìn)行共孵育,用反相HPLC法測定(-)-THP和(+)-THP的濃度;用終濃度為20μmo1/L主要CYP450酶的抑制劑對(-)-THP和(+)-THP在mixed-HLM的代謝進(jìn)行抑制,以初步篩選主要參與THP代謝的CYP450酶亞型;在初步篩選的基礎(chǔ)上進(jìn)一步用抑制劑酮康唑和伏氟沙明對(-)-THP和(+)-THP在mixed-HLM和IANO-HLM中的代謝進(jìn)行抑制。結(jié)果:在mixed-HLM和CY

10、P1A2高活性的IANO-HLM中,(+)-THP的代謝均顯著大于(-)-THP,IANO-HLM中(-)-THP和(+)-THP的代謝相比1nixed-HLM中的代謝有明顯增加,同時又以(+)-THP代謝增加的幅度更為明顯;20μmol/L伏氟沙明和酮康唑?qū)HP對映體在mixed-HLM中的代謝存在較為明顯的抑制作用;伏氟沙明在IANO-HLM中的抑制作用強(qiáng)于其在mixed-HLM中的作用,且其對(+)-THP的抑制作用強(qiáng)于(-)-

11、THP,而酮康唑在mixed-HLM中的抑制作用強(qiáng)于其在IANO-HLM中的作用,但對于THP對映體的抑制作用相當(dāng)。(+)-THP在rCYP1A2中的代謝顯著大于(-)-THP,而兩者在rCYP3A4的代謝則無明顯差異。結(jié)論:HLM對THP對映體的代謝存在立體選擇性,CYP1A2和CYP3A4為參與代謝THP對映體的主要CYP亞型;與其在RLM中代謝不同,CYP1A2傾向選擇性代謝(+)-THP,而CYP3A4對THP對映體的代謝不存在

12、立體選擇性。第三章THP對映體對小鼠CYP450酶誘導(dǎo)和抑制作用研究目的:考察THP對映體對小鼠肝臟主要CYP450酶的體外抑制及體內(nèi)誘導(dǎo)作用,從而預(yù)測其在臨床上可能發(fā)生的代謝性藥物相互作用,為臨床合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。方法:以探針底物法,考察左旋延胡索乙素((-)-tetrahydropalmatine,(-)-THP)和右旋延胡索乙素((+)-tetrahydropalmatine,(+)-THP)體外對小鼠肝微粒體主要Ⅰ相代謝酶C

13、YP1A2、CYP2C、CYP2D22、CYP2E1、CYP3A11活性的影響;采用微粒體體外孵育“雞尾酒”法(cocktail法),考察小鼠經(jīng)高、低劑量(-)-THP和(+)-THP(240 mg·kg-1和60mg·kg-1)連續(xù)灌胃7天后,其肝微粒體中主要Ⅰ相代謝酶活性的變化,以評價(-)-THP和(+)-THP對小鼠肝微粒體主要CYP450酶是否具誘導(dǎo)作用。結(jié)果:(-)-THP和(+)-THP體外對小鼠肝微粒體主要的CYP450

14、Ⅰ相代謝酶的抑制作用均不強(qiáng),(+)-THP對CYP2C抑制的IC50為43.89μmol/L,兩者對本研究考察的其它CYP亞型的IC50均大于100μmol/L;與溶劑處理組比較,小鼠經(jīng)60 mg/kg和240 mg/kg的(-)-THP處理后,CYP1A2活性分別增加了68.7％和73.0%(P＜0.05,P＜0.01),經(jīng)240mg/kg的(-)-THP處理后,小鼠CYP2C37活性增加了80.4%(P＜0.05),(-)-THP對