廣西巴馬小型豬促生長(zhǎng)激素釋放激素成熟肽基因克隆及其真核表達(dá)質(zhì)粒對(duì)小鼠生長(zhǎng)效應(yīng)的研究.pdf

1、促生長(zhǎng)激素釋放激素(Growth Hormone Releasing Hormone，GHRH)是一種蛋白類激素，由下丘腦合成并分泌。它能特異的誘導(dǎo)垂體生長(zhǎng)激素(Growth Hromone，GH)的合成與分泌，對(duì)脊椎動(dòng)物的生長(zhǎng)、發(fā)育及代謝調(diào)控起著極其重要的作用。 本研究以廣西巴馬小型豬基因組DNA為模板，用特異性引物擴(kuò)增GHRH外顯子3，以外顯子3為模板，用引物延伸懸掛PCR法擴(kuò)增GHRH成熟肽序列，純化后，連接到PMD18-

2、T載體，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌，篩選陽(yáng)性克隆，測(cè)序，同源性比較。結(jié)果表明：克隆的廣西巴馬小型豬GHRH成熟肽序列全長(zhǎng)為132bp，其中外顯子3基因序列長(zhǎng)105bp。廣西巴馬小型豬GHRH外顯子3基因序列與GenBank(NCBI)中報(bào)到的豬的GHRH外顯子3相比：同源性為97.14％；在第84位、98位、100位發(fā)現(xiàn)三處堿基突變，均為轉(zhuǎn)換，點(diǎn)突變均為無(wú)義突變。說(shuō)明廣西巴馬小型豬的矮小體型與GHRH成熟肽分子結(jié)構(gòu)之間沒(méi)有直接的關(guān)系。 為探

3、討注射GHRH真核表達(dá)質(zhì)粒對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)性能的影響，本研究選擇平均體重為14.05±5.48g的小鼠42只，按性別相同，體重相近，兩兩配對(duì)，分為空質(zhì)粒組和PEGFP-GHRH組。試驗(yàn)開(kāi)始，在空質(zhì)粒組小鼠右腿脛骨部肌肉按0.5μg質(zhì)粒/g體重注射．PEGFP-N1質(zhì)粒，同時(shí)PEGFP-GHRH組小鼠在相同部位按0.5μg質(zhì)粒/g注射PEGFP-GHRH質(zhì)粒。35天試驗(yàn)結(jié)果表明：外源的GHRH在肌肉中獲得了表達(dá)。GHRH基因至少可以在小鼠體內(nèi)滯