非人靈長類SPF種群建立過程中病毒抗體監(jiān)測研究.pdf

1、目的：
　　 非人靈長類動物在親緣關(guān)系上最接近人類，在組織結(jié)構(gòu)、免疫、生理和代謝等方面與人類高度相似。近年來，隨著生命科學(xué)的快速發(fā)展，對非人靈長類動物的需求一直在持續(xù)增加。擴大非人靈長類動物種群數(shù)量，獲得高質(zhì)量、純凈、穩(wěn)定的非人靈長類實驗動物已成為當(dāng)前我國科學(xué)研究進一步發(fā)展的迫切要求。雖然建立無特定病原體（Specific pathogen free，SPF）種群的成本很高，然而一旦建立起SPF級動物核心群，即可為科學(xué)研持續(xù)提供

2、高質(zhì)量的非人靈長類實驗動物。由于非人靈長類動物可能會自然攜帶或感染多種病毒，因此在建立SPF群體的過程中對病毒抗體的監(jiān)測就顯得極其重要，并直接影響建群的成功率。本研究貫穿于江蘇某大型猴場建立猴SPF種群的全過程，重點針對猴獼猴皰疹病毒1型（Cercopithecine herpesvirus 1，BV）、猴T細(xì)胞趨向性病毒I型（Simian T lymphotropic virus 1，STLV-1）、猴免疫缺陷病毒(Simian im

3、munodeficiency virus，SIV)和猴逆轉(zhuǎn)D型病毒(Simian type D retrovlrus，SRV)，對該猴場的食蟹猴和恒河猴進行了長期、大規(guī)模的病毒監(jiān)測，在此基礎(chǔ)上探尋合理的病毒監(jiān)測指標(biāo)和有效監(jiān)測頻率，從而提升種群建立的成功率，進一步促進我國SPF級非人靈長類實驗動物事業(yè)的發(fā)展。
　　 方法：
　　 (1)采用酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay，

4、ELISA）和斑點免疫檢測法（Dot immunoassay，DIA）檢測猴BV、STLV、SIV和SRV四種病毒的血清抗體水平，使用統(tǒng)計軟件SPSS13.0以Fisher精確概率法進行食蟹猴／恒河猴的幼年猴與成年猴之間、食蟹猴／恒河猴的幼年猴雌雄動物之間、食蟹猴／恒河猴的成年猴雌雄動物之間、食蟹猴和恒河猴的幼年猴之間以及食蟹猴和恒河猴的成年猴之間的病毒陽性率比較和分析；
　　 (2)收集相隔三個月和相隔一個月的病毒血清抗體檢測

5、結(jié)果，分析不同時間間隔對病毒血清學(xué)監(jiān)測結(jié)果的影響，探討病毒有效監(jiān)測頻率；
　　 (3)進行了膠體金法與ELISA和DIA法檢測猴BV、STLV、SRV病毒抗體的效果比較。
　　 結(jié)果：
　　 (1)BV病毒監(jiān)測。對于食蟹猴，雌性幼年猴和成年猴之間、幼年猴雌雄動物之間的病毒陽性率無顯著性差異：雄性幼年猴和成年猴的病毒陽性率分別為1.1％和7.5%，有顯著性差異(P=0.031)；成年猴雌雄動物的陽性率分別為2.2%

6、和7.5%，有顯著性差異(p=0.009)。對于恒河猴，雄性幼年猴和成年猴之間、幼年猴雌雄動物之間、成年猴雌雄動物之間的病毒陽性率無顯著性差異；雌性幼年猴和成年猴的病毒陽性率分別為0.5%和7.3%，有顯著性差異(P=0.010)。對比食蟹猴和恒河猴，兩個品種的雄性幼年猴之間、雌性成年猴之間、雄性成年猴之間的病毒陽性率無顯著性差異，而雌性幼年猴的病毒陽性率分別為7.3%和0，有顯著性差異(P=0.002)。
　　 (2)STLV

7、病毒監(jiān)測。對于食蟹猴和恒河猴，雌性幼年猴和成年猴之間、雄性幼年猴和成年猴之間、幼年猴雌雄動物之間、成年猴雌雄動物之間的病毒陽性率無顯著性差異。對比食蟹猴和恒河猴，兩個品種的雌性幼年猴之間、雄性幼年猴之間、雌性成年猴之間、雄性成年猴之間的病毒陽性率無顯著性差異。
　　 (3)SIV病毒監(jiān)測。對于食蟹猴，雌性幼年猴和成年猴之間、雄性幼年猴和成年猴之間、幼年猴雌雄動物之間、成年猴雌雄動物之間的病毒陽性率無顯著性差異。對于恒河猴，雌性幼

8、年猴和成年猴之間、幼年猴雌雄動物之間、成年猴雌雄動物之間的病毒陽性率無顯著性差異；雄性幼年猴和繁殖猴的病毒陽性率分別為0.7%和6.3%，有顯著性差異(P=0.028)。對比食蟹猴和恒河猴，兩個品種的雌性幼年猴之間、雄性幼年猴之間、雌性成年猴之間、雄性成年猴之間的病毒陽性率無顯著性差異。
　　 (4)SRV病毒監(jiān)測。對于食蟹猴，雌性幼年猴和繁殖猴之間的病毒陽性率無顯著性差異；雄性幼年猴和成年猴的病毒陽性率無顯著性差異；幼年猴雌雄

9、動物之間、成年猴雌雄動物之間的病毒陽性率無顯著性差異。對于恒河猴，雌性幼年猴和成年猴之間、幼年猴雌雄動物之間、成年猴雌雄動物之間的病毒陽性率無顯著性差異；雄性幼年猴和成年猴的病毒陽性率分別為0.7%和1.6%，有顯著性差異(P=0.028)。對比食蟹猴和恒河猴，兩個品種的雌性幼年猴之間、雄性幼年猴之間、雌性成年猴之間、雄性成年猴之間的病毒陽性率無顯著性差異。
　　 (5)病毒有效監(jiān)測頻率。同批食蟹猴相隔三個月檢測，BV、STLV

10、、SIV和SRV轉(zhuǎn)陽的比例分別為3/58、0/55、0/55和0/55;同批食蟹猴相隔一個月檢測，BV、STLV、SIV和SRV轉(zhuǎn)陽的比例均為0/93。
　　 (6)膠體金法與ELISA和DIA法檢測效果對比。對于BV、STLV和SIV，膠體金法與酶聯(lián)免疫吸附法的符合率為88.9%、81.8%和100%:對于SRV，膠體金法與斑點免疫檢測法檢測結(jié)果的符合率為77.3%。
　　 結(jié)論：
　　 在SPF級食蟹猴和恒河

11、猴種群建立過程中，本研究所采取的飼養(yǎng)管理模式、病毒檢測技術(shù)和檢測頻率條件下：
　　 (1)食蟹猴和恒河猴的BV、STLV、SIV、SRV病毒感染持續(xù)保持在較低水平；
　　 (2)食蟹猴和恒河猴在繁殖期BV病毒的感染發(fā)生率有隨著年齡的增長而增加的趨勢；
　　 (3)雄性恒河猴的SIV病毒感染率有隨著年齡的增長而增加的趨勢；
　　 (4)本飼養(yǎng)管理體系下，STLV、SIV、SRV三種病毒相隔三個月監(jiān)測一次是可