乙型肝炎病毒感染過程中白介素32表達水平的研究.pdf

1、目的：
　　乙型肝炎在全世界廣泛流行每年至少有一百萬人死于此病,同時也是影響我國全體國民身體健康最大的疾病之一。乙型肝炎病毒感染是導致慢性肝炎、肝硬化和肝癌的主要致病因素之一。白介素32(IL-32)是一種促炎細胞因子，能誘導免疫細胞(單核細胞和巨噬細胞)分泌炎性細胞因子,如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和IL-6的分泌。本研究致力于研究乙型肝炎病毒感染過程當中與白細胞介素-32(白介素-32,IL-32)的相互關系及其相關性,旨

2、在闡明IL-32被乙型肝炎病毒誘導表達水平的變化情況,并進一步證實這一炎癥因子在乙型肝炎病毒感染過程中發(fā)揮重要作用。
　　方法：
　　一、乙型肝炎患者外周血、細胞及組織中IL-32的檢測
　　1.通過ELISA實驗以64例乙型肝炎病毒感染者為實驗組，其血清按照不同病毒量進行分組，分為高病毒量、中病毒量、低病毒量三組，檢測被感染者的丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、白蛋白(ALB)及IL-32在

3、血清中的含量；同時以40例健康人為對照組，檢測其丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、白蛋白(ALB)及IL-32在血清中的含量，利用統(tǒng)計學方法對乙型肝炎患者IL-32的結果與健康人的結果進行比較并統(tǒng)計分析；
　　2.通過外周血單個核細胞提取技術分別提取72例乙型肝炎病毒感染者的PBMC和40例健康人的PBMC，以72例乙型肝炎病毒感染者為實驗組將患者的樣本按照不同病毒量進行分組，分為高病毒量、中病毒量、低病

4、毒量三組，檢測單個核細胞中IL-32的mRNA含量，以40例健康人為對照組，檢測單個核細胞中IL-32的mRNA含量，利用統(tǒng)計學方法對乙型肝炎患者外周血單個核細胞IL-32的mRNA含量結果與健康人的外周血單個核細胞IL-32的mRNA含量結果進行統(tǒng)計分析；
　　3.通過免疫組織化學染色技術對23例肝臟部分切除患者的肝臟組織進行染色，利用顯微鏡，觀察鏡下肝臟組織中IL-32化學染色情況，并拍照進行比較分析；
　　二、HepG

5、2細胞模型中IL-32的檢測
　　1.通過細胞培養(yǎng)技術，將HepG2肝細胞系細胞在體外進行培養(yǎng)，分別使用乙型肝炎病毒含量不同的患者血清和健康人血清對細胞進行刺激，將無血清刺激組作為對照組，有血清刺激組作為實驗組，采用ELISA實驗方法檢測培養(yǎng)上清液中IL-32的含量，用統(tǒng)計學方法對實驗結果數據進行統(tǒng)計分析；
　　2.通過細胞培養(yǎng)技術，將HepG2肝細胞系細胞進行體外培養(yǎng)，分別使用乙型肝炎病毒含量不同的患者血清和健康人血清對細

6、胞進行刺激，將無血清刺激組作為對照組，有血清刺激組作為實驗組，用RT-PCR技術檢測細胞中IL-32mRNA表達情況，將結果進行統(tǒng)計分析；
　　3.通過細胞培養(yǎng)技術和免疫組織化學染色技術，分別使用乙型肝炎病毒含量不同的患者血清和健康人血清對細胞進行刺激，將無血清刺激組作為對照組，有血清刺激組作為實驗組，將細胞進行固定、石蠟包埋后組織切片進行IL-32免疫組織化學染色，觀察不同病毒含量的血清進行刺激后細胞中IL-32的表達情況，利用

7、顯微鏡觀察鏡下肝臟組織中IL-32化學染色情況，并拍照進行比較分析；
　　結果：
　　一、乙型肝炎患者外周血及組織中IL-32的檢測
　　1.血清IL-32 ELISA檢測結果表明，實驗組乙型肝炎感染患者病毒含量高、中、低組IL-32的含量與健康人對照組有明顯差異（p<0.05），同時我們發(fā)現(xiàn)高病毒含量組的IL-32與中、低病毒含量組都有明顯差異（p<0.05）；
　　2.外周血PBMC中IL-32 mRNA含量

8、檢測表明，實驗組乙型肝炎感染患者病毒含量中、低組IL-32 mRNA的含量與健康人對照組有明顯差異（p<0.05），同時我們發(fā)現(xiàn)高病毒含量組的IL-32 mRNA的含量與中、低病毒含量組都有明顯差異（p<0.05）；
　　3.IL-32免疫組織化學染色結果表明23例臨床肝臟組織切片中，炎癥組織中IL-32明顯著色，IL-32表達明顯增高而正常組織中著色較淺；
　　二、HepG2細胞模型中IL-32的檢測
　　1.Hep

9、G2細胞乙肝病毒不同病毒量刺激組和陰性血清刺激ELISA結果表明，高、中、低病毒含量刺激的細胞培養(yǎng)上清液中的IL-32與陰性血清刺激組比較有明顯差異（p<0.05），高病毒含量組與中、低病毒含量組比較都有明顯差異（p<0.05），對照組與實驗組均存在顯著差異(p<0.05)；
　　2.HepG2細胞經過乙肝病毒不同病毒量刺激組和陰性血清刺激組IL-32mRNA的結果表明，高、中、低病毒含量刺激的細胞中的IL-32mRNA與陰性血清

10、刺激組比較有明顯差異（p<0.05），實驗組與對照組也存在明顯差異（p<0.05）；
　　3.HepG2細胞經過乙肝病毒不同病毒量刺激組和陰性血清刺激組，IL-32免疫組織化學染色結果表明，高病毒刺激組與未受血清刺激組著色基本無差異，而與中、低病毒含量及陰性血清刺激組著色存在明顯差異；
　　結論：
　　1.在乙型肝炎在活動期時隨著HBVDNA含量的不同，IL-32在血清中含量降低，其中病毒含量較高時降低更為顯著，外周血