ERCC1和XPD表達與細胞核形態(tài)圖像分析預示進展期上皮性卵巢癌初次鉑類化療反應的研究.pdf

1、一.研究背景和目的 上皮性卵巢癌(epithelialovariancancer,EOC)是致死率最高的婦科惡性腫瘤。多數(shù)卵巢癌在初次診斷時居進展期，其標準治療手段為初次細胞減滅術后輔以鉑類為基礎的聯(lián)合化療。目前，進展期卵巢癌初次治療的有效率可高達70-80％，但多數(shù)患者在初次治療后2-3年復發(fā)，并最后因復發(fā)耐藥而死亡，因此藥物耐受是改善卵巢癌長期生存的主要障礙。 鉑類包括順鉑和碳鉑等，作用機制為與DNA形成鉸鏈，鉑導致的DN

2、A損害通常是通過核苷酸剪切修復途徑(nucleotideexcisionrepair，NER)而修復，已有研究提示NER表達異常與鉑類藥物耐受有關。但卵巢惡性腫瘤是一組織異源性很大的腫瘤，不同上皮性卵巢癌對藥物的反應性不同，在卵巢癌中有關NER表達異常與治療敏感性的研究較少。本研究選擇化療反應不同的漿液性和透明細胞卵巢癌為研究對象，研究臨床藥物敏感性、組織類型不同和化療前后的卵巢癌組織中ERCC1和XPD的表達情況及細胞核形態(tài)圖像定量分

3、析，旨在為臨床克服和預示鉑耐受提供研究。 二.資料和方法 1.研究對象：浙江大學醫(yī)學院附屬婦產科醫(yī)院1998-2004年住院接受初次手術治療并經病理診斷為漿液性卵巢癌或透明細胞癌的晚期卵巢癌患者(≥Ⅲ期)，所有入選病例按計劃完成以鉑類為基礎的聯(lián)合化療達6個療程以上。 2.研究方法：2.1試劑和儀器：ERCC1鼠抗人單克隆抗體：DBS公司抗鼠二抗SP超敏試劑盒：Maixin公司XPD兔抗人多克隆抗體[TFⅡHp8(H-1

4、50)]：SantaCruz生物技術公司抗兔二抗SP超敏試劑盒：Maixin公司磷酸鹽(PBS)緩沖液：Maixin公司枸掾酸鈉修復液：Maixin公司DAB試劑盒：DAKO公司HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖文報告分析系統(tǒng)(同濟醫(yī)科大學清屏影像公司) 試劑：偏重亞硫酸氫鈉、堿性品紅、活性碳均由上海試劑廠第三分廠生產。 2.2臨床資料復習病例檔案和病理切片，記錄以下臨床和病理參數(shù)：2.2.1年齡和絕經狀態(tài)：漿液性卵

5、巢癌組：年齡分布24-64歲，平均年齡為49.0歲。未絕經41例，已絕經22例。透明細胞癌組：年齡分布37-68歲，平均年齡為52.0歲。 2.2.2組織類型和病理分級：漿液性卵巢癌組63例，其中高分化，中分化和低分化分別為5、25和33例。透明細胞癌組15例，其中單純性5例，混合性10例。 22.2.3手術減滅結果和化療方案：漿液性卵巢癌以手術后＜2cm病灶為標準，理想手術26例，非理想手術37例。接受鉑類+環(huán)磷酰胺化

6、療39例，鉑類+泰素24例，其中順鉑36例，碳鉑27例。順鉑劑量75mg/m2，碳鉑劑量AUC5，泰素劑量175mg/m2?；熼g隔21天。 2.2.4化療療效評價及分組：化療近期療效以1979年WHO標準將化療療效分為完全緩解(CR)，部分緩解(PR)，微小反應(MR)，穩(wěn)定(SD)和進展(PD)。以Freitas等[4]的標準評定化療療效的敏感和耐藥。根據(jù)該標準進行分組：漿液性卵巢癌組化療敏感36例，耐藥27例；其中13例進

7、行新輔助化療，獲得化療前、后組織；透明細胞癌化療敏感8例，耐藥7例。 2.3上皮性卵巢癌ERCC1和XPD蛋白表達：2.3.1組織標本：分漿液性卵巢癌，漿液性卵巢癌新輔助化療+間隔手術和透明細胞癌組織。 2.3.2免疫組化方法：用Envision二步法顯示ERCC1、XPD的表達水平。采用免疫組化定量分析H-SCORE：∑p(i+1)進行計分。 2.4細胞核形態(tài)圖像定量分析Feulgen's染色切片置于HPIAS

8、-1000高清晰度彩色病理圖文報告分析系統(tǒng)40×10倍視野下，采集細胞核圖像，規(guī)定所選擇的細胞核清晰可見，核膜、染色質完整，無人工因素變形，然后進行細胞核面積、周長、形態(tài)因子、異形指數(shù)、等效直徑、細胞核的光密度測量得出分數(shù)，總共5個視野，取其均數(shù)，確定為其測量值。 2.5統(tǒng)計方法：(1)所有數(shù)據(jù)分為計數(shù)資料和計量資料，計數(shù)資料之間比較采用卡方檢驗。計量資料結果以均數(shù)±標準差表示，根據(jù)數(shù)據(jù)分布的結果，正態(tài)分布多組間的比較采用單因素

9、方差分析(onewayANOVA)，非正態(tài)分布采用Kruskal-WallisH檢驗；正態(tài)分布兩組間比較采用兩獨立樣本T檢驗，非正態(tài)分布采用Mann-WhitneyU檢驗，方差不齊的數(shù)據(jù)用修正T檢驗。 (2)均為雙側檢驗，以P＜0.05判斷具有統(tǒng)計學意義。 (3)雙變量的相關分析用spearman等級相關分析。 (4)兩類之間多變量分析采用二項邏輯回歸分析，確定各變量的重要性。 所有數(shù)據(jù)均納入SPSS11

10、.0統(tǒng)計軟件進行分析。 三.結果 1.上皮性卵巢癌ERCC1和XPD蛋白表達、細胞核形態(tài)分級與臨床病理參數(shù)的關系 1.1ERCC1和XPD蛋白表達免疫組化定位均在細胞核，ERCC1平均表達率為39.7％，平均計數(shù)得分為2.22；XPD平均表達率為35.9％，平均計數(shù)得分為2.21. 1.2非理想減滅術患者ERCC1和XPD蛋白表達高于理想減滅手術患者，其差異有統(tǒng)計學意義。 1.3漿液性卵巢癌中50歲以下

11、、絕經前患者核面積及異形指數(shù)較大，化療中鉑類+泰素組較鉑類+環(huán)磷酰胺組平均光密度高，碳鉑組較順鉑組平均光密度高、核周長長。 1.4上皮性卵巢癌中透明細胞癌ERCC1和XPD蛋白表達高于卵巢漿液性癌。 2.漿液性卵巢癌ERCC1和XPD蛋白表達與化療反應關系 2.1漿液性卵巢癌耐藥組ERCC1和XPD蛋白表達高于敏感組，其差異有統(tǒng)計學意義。 2.2新輔助化療后較化療前組織ERCC1和XPD蛋白表達上調，其差

12、異有統(tǒng)計學意義。 3.漿液性卵巢癌中細胞核面積、細胞核周長耐藥組較敏感組大，其差異有統(tǒng)計學意義。 4.臨床病理參數(shù)，ERCC1和XPD蛋白和核形態(tài)圖像分析與化療反應關系分析 44.1ERCC1和XPD蛋白表達率存在相關，r=0.669，p=0.000；ERCC1表達率和細胞核面積存在相關，r=0.257，p=0.042；ERCC1表達率和細胞核周長存在相關，r=0.283，p=0.025；細胞核面積和細胞核周長存

13、在相關，r=0.894，p=0.000。 4.2漿液性卵巢癌中對化療敏感和耐藥之間的判別分析，綜合了臨床病理參數(shù)、ERCC1、XPD蛋白和細胞核形態(tài)圖像分析各參數(shù)，統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)ERCC1、XPD、核面積、核周長、手術減滅效果兩類不同化療反應間的差異具有顯著性意義；其中ERCC1蛋白、核面積為具有統(tǒng)計學意義的獨立參數(shù)，對鉑類耐藥性的判斷意義較大。 四.結論 1.ERCC1和XPD蛋白表達在透明細胞癌高于漿液性卵巢癌，臨床化療