Gax基因抑制血管外膜成纖維細胞增生的試驗研究.pdf

1、眾多研究證明，血管內(nèi)皮細胞(VEC)、血管平滑肌細胞(VSMC)、血管外膜成纖維細胞(AF)、其它的血管壁細胞和基質(zhì)均參與血管重構(gòu)。既往研究把VEC、VSMC作為重點，近期研究證明血管外膜中的主要細胞成分AF并非是“靜止、被動”的細胞，而是對多種刺激具有應答能力的“運動、有活性”的細胞，被激活后具有增殖遷移、表型轉(zhuǎn)化、粘附凋亡、分泌細胞因子和合成外基質(zhì)能力。最近發(fā)現(xiàn)血管外膜含有較多的祖細胞，不論在體內(nèi)或是體外都能夠分化為VSMC。盡管在

2、這方面的研究存在爭議，但越來越多的證據(jù)說明AF在血管增殖性病變具有重要地位。盡管人們在血管重構(gòu)過程中對AF作用機制作了大量的研究，取得了一些進展，但AF的許多生物學機制并不清楚。TGF-βI被認為是影響AF生物功能最重要的多功能細胞因子，但TGF-βI對于AF具體的作用機制尚不清楚。 在血管重構(gòu)過程中，諸如VEGF、FGF等生長因子、它們的受體以及信號轉(zhuǎn)導通路在血管細胞增殖中的作用研究較為深入，然而關(guān)于核轉(zhuǎn)錄因子如何將這些信號

3、整合并啟動級聯(lián)調(diào)節(jié)反應研究很少。在轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)節(jié)是眾多細胞增殖信號轉(zhuǎn)導通路的核心，在真核細胞基因表達中最重要。Gax基因是近來發(fā)現(xiàn)的核轉(zhuǎn)錄因子，在心血管系統(tǒng)調(diào)節(jié)個體發(fā)育、器官形成、細胞生長、分化和遷移中起重要作用。Gax基因是抑止性轉(zhuǎn)錄因子中唯一的同源異形盒基因，在干預血管平滑肌細胞和內(nèi)皮細胞增殖方面具有顯著的作用，但Gax基因是否在AF中過表達并能調(diào)節(jié)它的增殖尚不清楚，國內(nèi)外未見類似研究的報道。 綜上所述，我們提出這樣的的假

4、設(shè)：TGF-βI能夠激活影響AF增殖的信號轉(zhuǎn)導網(wǎng)絡(luò)，而轉(zhuǎn)錄抑制因子Gax基因能夠在體外AF中有效地表達，并且能夠阻斷上述網(wǎng)絡(luò)內(nèi)信號通路的連接和交互對話(cross-talk)，從而整合和調(diào)控AF的生物活性。本研究正是根據(jù)以上思路，設(shè)計體外試驗以驗證這一假說。 結(jié)論： 1．Gax基因能夠在血管外膜的AF表達，表達量呈Ad-Gax劑量和時間依賴性。Gax基因?qū)F功能的干預也呈劑量和時間依賴性。 2．TGF-βl對AF增

5、殖、遷移和粘附功能均有促進作用。Gax基因能夠有效地抑SUTGF-βI對AF增殖、遷移和粘附的促進作用。 3．TGF-βl能夠激活CDK4，抑制Pl5，P16和P21，增加AF細胞周期的S期百分比。Gax基因能夠下調(diào)CDK4和上調(diào)P15、P16和P21 mRNA和蛋白的表達，增加AF細胞周期中GO一Gl的百分比并促進其凋亡。 4．TGF-βI能夠激活Smad，Integrin-FAK-PYK2，Ras-MEKl-ERK2