耳蝸血管紋微血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性分子調(diào)控機(jī)理的初步研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文耳蝸血管紋微血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性分子調(diào)控機(jī)理的初步研究姓名：潘明金申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：耳鼻咽喉科學(xué)指導(dǎo)教師：張學(xué)淵2002.5.1耳毒性藥物速尿作為處理因素，將其分別與豚鼠耳蝸血管紋微血管內(nèi)皮細(xì)胞孵育3 小時(shí)，然后對(duì)耳蝸血管紋微血管內(nèi)皮細(xì)胞c A M P 和F —a c t i n 進(jìn)行檢測(cè)，以研究霍亂毒素和速尿?qū)Χ佈芗y微血管內(nèi)皮細(xì)胞c A M P 含量和F 一量的影響。設(shè)對(duì)照組。豚鼠耳蝸血管紋組織塊經(jīng)膠原

2、酶I 消化，培養(yǎng)2 4 小時(shí)，培分細(xì)胞貼壁伸展，呈短梭形或長(zhǎng)圓形。7 天后，培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)出現(xiàn)多個(gè)由短梭形或鈍圓形細(xì)胞呈“鋪路石狀”排列形成的細(xì)胞島。經(jīng)過(guò)反復(fù)多次刮除雜細(xì)胞并使用內(nèi)皮細(xì)胞條件培養(yǎng)液，細(xì)胞形態(tài)趨于一致，為短梭形或鈍圓形細(xì)胞。細(xì)胞排列致密時(shí)，細(xì)胞間隙消失，彼此融合形成致密融合的細(xì)胞單層，呈現(xiàn)典型的“鋪路石”樣外觀。所培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)免疫組化( S P 法) 鑒定，9 9 ％以上細(xì)胞胞漿內(nèi)具有內(nèi)皮細(xì)胞特有的Ⅷ因子抗原，提示為內(nèi)皮細(xì)胞。用

3、所培養(yǎng)的耳蝸血管紋微血管內(nèi)皮細(xì)胞建立通透性體外模型；2 ．霍亂毒素能明顯增強(qiáng)耳蝸血管紋微血管內(nèi)皮的屏障功能，使牛血清白蛋白和伊文氏蘭的通透率顯著降低( P < 0 ．0 1 ) ；3 ．本模型牛血清白蛋白和伊文氏蘭的通透曲線都為上升曲線。同對(duì)照組曲線相比較，霍亂毒素組曲線明顯低于對(duì)照組，而速尿組曲線則明顯高于對(duì)照組，進(jìn)一步提示霍亂毒素能顯著增強(qiáng)耳蝸血管紋微血管內(nèi)皮的屏障功能，而速尿則能顯著減弱耳蝸血管紋微血管內(nèi)皮的屏障功能；4 ．

4、霍亂毒素能使耳蝸血管紋微血管內(nèi)皮細(xì)胞c A M P 的含量顯著增J J f l ( P < 0 ．0 1 ) ，增加可達(dá)2 —1 0 倍，且隨著霍亂毒素濃度的增大有增多的趨勢(shì)，內(nèi)皮細(xì)胞F —a c t i n 的含量則顯著減少( P < 0 ．0 5 ) ，且核周F —a c t i n 減少尤為明顯；而速尿作用恰好與之相反，能使耳蝸血管紋微血管內(nèi)皮細(xì)胞c A M P 的含量顯著減少( P < O ．0 1 ) ，內(nèi)皮