miR-34a在甲狀腺癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、MicroRNA，簡(jiǎn)稱miRNA，是近年來(lái)分子生物學(xué)和遺傳學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。MiRNA是一類新近發(fā)現(xiàn)的全長(zhǎng)約為21-25個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的內(nèi)源性非編碼單鏈小分子RNA，它的主要作用是通過(guò)綁定下游靶基因的mRNA上互補(bǔ)的3'-非翻譯區(qū)來(lái)下調(diào)蛋白的表達(dá)，從而發(fā)揮對(duì)細(xì)胞增殖，分化，侵襲和凋亡等過(guò)程的調(diào)控作用，并且與許多腫瘤的發(fā)生，發(fā)展相關(guān)。有證據(jù)顯示miRNA在癌與正常細(xì)胞之間存在差異表達(dá)。miRNA的異常表達(dá)可通過(guò)調(diào)節(jié)參與癌癥相關(guān)進(jìn)程的基因及旁

2、路途徑影響腫瘤的進(jìn)展，提示其可能扮演著類似于抑癌基因或原癌基因的角色，調(diào)控著腫瘤細(xì)胞多種重要的生物學(xué)行為。
　　 甲狀腺癌是最常見(jiàn)的內(nèi)分泌惡性腫瘤，約占人類所有惡性腫瘤的1-2％，近年來(lái)許多研究顯示其發(fā)病率呈不斷上升的趨勢(shì)[1]。臨床中最常見(jiàn)的類型為甲狀腺乳頭狀癌(PTC)，約占甲狀腺癌的80％[2]，早期易發(fā)生區(qū)域淋巴轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率可達(dá)30-50％[3]。目前，甲狀腺癌的發(fā)病機(jī)制尚不是十分清楚。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)甲狀腺癌中可見(jiàn)一些m

3、iRNAs表達(dá)異常，2005年He等[4]亦首次揭示了甲狀腺乳頭狀癌(PTC)及甲狀腺正常組織中miRNAs的表達(dá)譜。
　　 本研究，我們?cè)谇捌诟咄康纳镄酒夹g(shù)篩檢甲狀腺癌中異常表達(dá)的microRNA的研究基礎(chǔ)上，參考國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，確立了miR-34a作為我們研究的重點(diǎn)。利用Northern blotting技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)miR-34a在甲狀腺癌組織與癌周非瘤組織中的表達(dá)差異，并評(píng)估它與甲狀腺癌

4、臨床病理資料的關(guān)系，通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞增殖檢測(cè)(MTS)和流式細(xì)胞儀技術(shù)分析miR-34a對(duì)甲狀腺癌增殖和細(xì)胞周期的影響，初步探討其在甲狀腺癌發(fā)生，發(fā)展中的作用。
　　 目的:
　　 探討甲狀腺癌中miR-34a的表達(dá)及其與臨床病理資料的聯(lián)系，并探討其對(duì)甲狀腺癌細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響。
　　 方法:
　　 甲狀腺癌病人術(shù)后的腫瘤和癌周非瘤組織標(biāo)本共42例被收集和提取純化得高質(zhì)量的RNA，運(yùn)用North

5、ern blotting及實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)miR-34a在甲狀腺癌組織及癌周非瘤組織中的表達(dá)水平，采用scion image軟件和2-△△Ct算法量化miR-34a表達(dá)的相關(guān)數(shù)據(jù)，并將其與術(shù)后病理參數(shù)相聯(lián)系，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析miR-34a之于甲狀腺癌臨床病理資料間的關(guān)系。細(xì)胞水平上，通過(guò)轉(zhuǎn)染miR-34a成熟體入甲狀腺癌細(xì)胞株（BHP和ARO細(xì)胞），利用MTS法和流式細(xì)胞儀等方法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響。
　　

6、 結(jié)果:
　　 1.Northern blotting及實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR結(jié)果均顯示miR-34a在人甲狀腺癌組織中較相應(yīng)癌周非瘤組織呈現(xiàn)顯著性高表達(dá)。
　　 2.熒光實(shí)時(shí)定量RT-PCR發(fā)現(xiàn)甲狀腺癌組織中miR-34a的表達(dá)水平與腫瘤大小和惡性程度呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，miR-34a表達(dá)越高，其腫瘤越小，惡性程度越低。反之則更易出現(xiàn)高分期，多灶性及大病灶的甲狀腺癌，各組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 3.轉(zhuǎn)入miR-34

7、a成熟體的甲狀腺癌細(xì)胞株BHP和ARO細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖水平均顯著降低，且BHP細(xì)胞被阻滯在GO/G1期，分裂期細(xì)胞顯著減少，而ARO細(xì)胞似乎對(duì)miR-34a的細(xì)胞周期阻滯作用不敏感。
　　 結(jié)論:
　　 甲狀腺癌組織中的miR-34a較癌周非瘤組織高表達(dá)，但其在甲狀腺癌中的表達(dá)水平與腫瘤的大小和惡性程度呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。MiR-34a可能在甲狀腺癌發(fā)生的早期作為自身保護(hù)性因素被誘導(dǎo)調(diào)高，其通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期，抑制細(xì)胞增殖等因素對(duì)抗