miRNA-1在離體大鼠心臟缺血后處理中對(duì)縫隙連接蛋白43的作用.pdf

1、背景:急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）嚴(yán)重威脅人類健康，再灌注治療是目前拯救瀕死心肌和改善預(yù)后的最主要措施，但是缺血再灌注損傷（ischemia/reperfusion injury, IRI）使獲益大打折扣。缺血后處理(ischemiapostconditioning，I-postC)可保護(hù)心肌，減輕IRI?？p隙連接蛋白43(connexin43，Cx43)是參與IRI的重要蛋白，是縫隙連

2、接(gap junction，GJ)的主要構(gòu)成成分，Cx43數(shù)量和分布的改變與GJ電耦聯(lián)以及再灌注心律失常(reperfusion arrthymia，RA)和心肌梗死范圍等密切相關(guān)。miRNA-1是參與調(diào)控IRI的主要miRNA之一，其過表達(dá)可以加重IRI，I-postC可抑制它過表達(dá)。已有研究表明Cx43是miRNA-1的作用靶點(diǎn)之一。但是，在缺血再灌注及后處理時(shí)miRNA-1能否通過影響Cx43的表達(dá)和分布參與IRI的調(diào)節(jié)目前尚不

3、明確。
　　目的:1、觀察I-postC對(duì)Cx43表達(dá)、分布和miRNA-1表達(dá)以及對(duì)RA、左室發(fā)展壓(left ventricular develop pressure，LVDP)、心肌梗死面積的影響;2、觀察miRNA-1在離體大鼠心臟I-postC中對(duì)Cx43表達(dá)和分布的作用。
　　方法:將55只Wistar雄性大鼠隨機(jī)分為正常組（N組）、缺血再灌注組（I-R組）、缺血后處理組（I-postC組）、agomir-1+缺

4、血后處理組（agomir-1組）和antagomir-1+缺血后處理組（antagomir-1組），各11只。其中，agomir-1組和antagomir-1組分別給予agomir-1（100pmol.kg-1.d-1）及antagomir-1(200pmol.kg-1.d-1)行尾靜脈注射3日。然后在進(jìn)行肝素化和麻醉后，開胸取心，應(yīng)用Langendorff逆行灌流系統(tǒng)對(duì)離體心臟進(jìn)行灌流。N組:不結(jié)扎前降支;I-R組:結(jié)扎前降支30mi

5、n后，行再灌注;I-postC組、agomir-1組及antagomir-1組:結(jié)扎前降支30min后，行后處理。記錄分析RA、LVDP、心肌梗死面積。采用RT-PCR、Western Blot和免疫組織化學(xué)方法觀察各組大鼠離體心臟左室心肌miRNA-1表達(dá)和Cx43蛋白表達(dá)與分布的情況。應(yīng)用SPSS20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性意義。
　　結(jié)果:1、各組間RA的比較:各組間RA評(píng)分有差異(P＜0.05)

6、。與N組比較，I-R組RA評(píng)分增高（P＜0.01），而I-postC組與N組無差異。I-postC組比I-R組的VT、VF時(shí)程縮短、發(fā)生率降低，RA評(píng)分降低（P＜0.01）;而與I-postC組比較，agomir-1組VT的時(shí)程延長、發(fā)生率升高，RA評(píng)分增高（均P＜0.01）;antagomir-1組RA無差異。
　　2、各組間LVDP的比較:基礎(chǔ)態(tài)，各組間LVDP無差異(P＞0.05);缺血態(tài)，I-R組、I-postC組、ago

7、mir-1組及antagomir-1組LVDP均比N組降低（均P＜0.01）;再灌注態(tài)，I-R組和agomir-1組的LVDP繼續(xù)降低，LVDP比N組低（均P＜0.01），在I-postC組和antagomir-1組，LVDP均比缺血態(tài)升高，與N組無差異。與I-postC組相比，agomir-1組LVDP降低(P＜0.05)，而antagomir-1組無差異。
　　3、各組心肌梗死面積比較:I-R組、I-postC組、agomir

8、-1組、antagomir-1組心肌梗死面積分別為(50.44±1.39)％，（27.58±1.05）％，（62.72±1.20）％，（27.25±1.29）％（P＜0.01）。I-R組、agomir-1組梗死面積大于I-postC組（均P＜0.01），I-postC組和antagomir-1組比較無差異。
　　4、miRNA-1 RT-PCR結(jié)果:與N組比較，I-R組miRNA-1表達(dá)增高約2.6倍，I-postC組比I-R組m

9、iRNA-1表達(dá)降低約50％（P＜0.01）;與I-postC組比，agomir-1組表達(dá)增高約78％(P＜0.01)，antagomir-1組表達(dá)降低32％(P＜0.01)。
　　5、Western Blot結(jié)果:I-R組比N組Cx43表達(dá)減少，I-postC組比I-R組Cx43表達(dá)增多，并接近于N組水平;與I-postC組比較，agomir-1組Cx43表達(dá)減少，但仍高于I-R組，antagomir-1組Cx43表達(dá)無差異。<

10、br>　　6、Cx43免疫組化結(jié)果:與N組比較，I-R組和agomir-1組陽性表達(dá)量少且排列紊亂，在端端連接分布減少，側(cè)側(cè)連接分布增多。I-postC組和antagomir-1組，Cx43陽性表達(dá)增多，分布較規(guī)則。與I-postC組比較，agomir-1組陽性表達(dá)量少，排列紊亂，而antagomir-1組無明顯差異。
　　結(jié)論:1、I-postC可抑制再灌注引起的miRNA-1過表達(dá)，Cx43減少和再分布，減少RA發(fā)生，改善LV