縫隙連接參與缺血后處理和Heptanol處理的心肌保護作用.pdf

1、缺血后處理的概念是2003年zhao等首次提出的,它是指在心肌長時間缺血后,于復灌初期立即給予心肌反復多次短暫的復灌/停灌,具有明顯的對抗心臟缺血/復灌損傷的保護作用.但缺血后處理的心肌保護作用機制尚未完全清楚.近幾年來的研究表明,縫隙連接(gapiunction)通訊參與缺血復灌心肌的保護作用.縫隙連接是存在于相鄰細胞間的膜通道結(jié)構(gòu),由相鄰的兩個細胞質(zhì)膜上的連接子相互銜接而成,縫隙連接對心肌細胞電同步興奮和代謝耦聯(lián)起著重要作用,同時縫

2、隙連接通訊也受到一些藥物的影響,如H印tanolo Heptanol是一種脂溶性的縫隙連接脫耦聯(lián)劑,能可逆地抑制縫隙連接.我們前期的研究發(fā)現(xiàn),Heptanol可以發(fā)揮類似心肌缺血預處理的效應.據(jù)報道,缺血后處理與缺血預處理存在一些共同的保護機制.我們假設,縫隙連接可能也參與缺血后處理的心肌保護作用.本實驗旨在探討缺血后處理和Heptanol處理在心肌缺血復灌損傷中的作用,以及縫隙連接是否參與缺血后處理的心肌保護作用. 目的:

3、 1.在大鼠離體心臟和整體心臟缺血/復灌模型上,觀察缺血后處理和Heptanol處理的心肌作用; 2.觀察縫隙連接在缺血后處理和Heptanol處理心肌保護作用中的地位和作用. 方法: 1.在體大鼠缺血/復灌模型和缺血后處理的方法大鼠麻醉固定,暴露心臟后,絲線結(jié)扎冠狀動脈左前降支30 min,恢復灌流120 min作為缺血/復灌過程,在停灌后復灌即刻立即給予3次復灌/停灌循環(huán),每次各10 s,共計1min行缺

4、血后處理.2.離體局部缺血/復灌模型和缺血后處理的方法離體灌流心臟結(jié)扎左冠狀動脈前降支30 min,恢復灌流120 min作為缺血/復灌過程,在停灌后復灌即刻立即給予3次復灌/停灌循環(huán),每次各10 s,共計1min行缺血后處理.3.離體全心停灌/復灌模型和缺血后處理的方法離體灌流心臟全心停灌30min復灌120min,在停灌后復灌即刻立即給予6次全心復灌/停灌循環(huán),每次各10 s,共計2 min行缺血后處理.4.左室功能評價連續(xù)記錄復灌

5、過程中左心室發(fā)展壓(1eft ventricular developed pressure,LNDP)、心率(heart rate,HR)、心率與發(fā)展壓的乘積(rate-pressure product,RIP)、左心室內(nèi)壓最大上升和下降速率(maximal rise/fall rate of left ventricular pressure,±dP/dt<,max>)等各項動力學指標,測定復灌各時間點單位時間的冠脈流量.5.灌流心臟

6、流出液乳酸脫氫酶的測定在復灌5min、10min、20min收集冠脈流出液,用分光光度法測定乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase,LDH)的含量.6.心律失常評分法用心律失常評分法對心律失常嚴重程度進行定量分析.7.心肌梗死面積測定采用TTC染色法測定梗死面積,掃描儀掃描后使用Image J軟件計算梗死區(qū)面積占危險區(qū)面積的比例.8.心肌傳導速度測定采用四電極法測定心肌傳導速度,即將傳導距離除以兩對記錄電極所記錄到心外膜電

7、圖的起始點的時間差. 結(jié)果: 1.缺血后處理對缺血/復灌心肌的影響 (1)在離體心臟灌流中,與I/R組相比,缺血后處理組LVDP、RPP明顯增高、±dP/dt<,ma>增大、冠脈流量增多;復灌期間冠脈流出液中LDH含量降低、心肌梗死面積減小,復灌期間心律失常評分下降,復灌時心肌傳導速度降低. (2)在整體大鼠心肌缺血/復灌中,缺血后處理組的心肌梗死面積明顯減小,復灌期間心律失常評分下降. 2.He

8、ptanol處理對缺血/復灌心肌的影響 (1) Heptanol預處理對缺血/復灌心肌的影響在離體心臟灌流中,各濃度Heptanol均使心肌梗死范圍縮小,并呈劑量依從性;高濃度Heptanol在心肌缺血過程及其后120 min的復灌過程中心律失常評分下降. 在整體大鼠心臟,Heptanol可使心肌缺血過程及其后120 min的再灌注過程中心律失常評分下降,中高劑量Heptanol均使心肌梗死面積縮小. (2) H

9、eptanol后處理對缺血/復灌心肌的影響在離體心臟灌流中,各濃度Heptanol使心肌復灌過程中心律失常評分下降,高濃度Heptanol使心肌梗死范圍縮小,并呈劑量依從性;中高濃度Heptanol降低心肌復灌的LDH含量,0.5、1 mmol/L Heptanol降低心肌復灌時的傳導速度,0.1 mmol/L Heptanol降低心肌復灌早期的傳導速度. 在整體大鼠心臟,各劑量Heptanol均使心肌梗死面積縮小,中高劑量He

10、ptanol降低復灌時心律失常評分. 3.AAP10對Heptanol和缺血后處理心臟作用的影響 (1) AAP10對心肌傳導速度的影響1×10<'-6>、1×10<'-7>、1×10<'-8>mol/L的AAP10均增加離體心臟心肌的傳導速度,并呈劑量依從性. (2) AAP10對缺血/復灌心肌的作用與I/R組相比,AAP10+I/R組的RPP、LVDP、±dP/dt<,ma>和冠脈流量、LDH含量、心肌梗死面

11、積無明顯變化,但明顯降低了復灌期各時間點的心律失常評分,增加復灌30min前的心肌傳導速度. (3) AAP10減弱缺血后處理的心肌保護作用于復灌初期同時給予AAP10取消了缺血后處理增高復灌期RPP、INDP、±dP/dt<,max>的作用,取消了缺血后處理增加冠脈流量和降低冠脈流出液中IDH釋放的作用,也取消了缺血后處理縮小心肌梗死范圍和降低心律失常評分的作用,復灌時心肌傳導速度比缺血后處理組加快. (4) AAP1