應(yīng)用噬菌體展示文庫(kù)篩選神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）高親和力受體TrkA模擬配基的研究.pdf

1、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素是一類對(duì)中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)有著深刻影響的化學(xué)物質(zhì),它調(diào)控著生長(zhǎng)和分化.NGF是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素家族中最早被發(fā)現(xiàn)的成員,它通過(guò)低親和力受體p75NTR和特異性高親和力受體TrkA,調(diào)節(jié)神經(jīng)原的存活,促進(jìn)神經(jīng)原的生長(zhǎng)以及上調(diào)特定神經(jīng)原的功能比如介導(dǎo)疼痛和炎癥反應(yīng)等.這些作用都提示NGF的拮抗劑和激動(dòng)劑可以在上述過(guò)程中發(fā)揮重要作用.但是,NGF不易透過(guò)血腦屏障限制了NGF在臨床上的使用.因此研發(fā)具有NGF受體結(jié)合特性,可以作為激動(dòng)劑或拮抗

2、劑的NGF樣的小分子模擬物將在發(fā)展NGF潛在的臨床應(yīng)用中具有重要的意義.本組前期工作中利用R2L1細(xì)胞進(jìn)行差異篩噬菌體隨機(jī)肽庫(kù):12肽庫(kù)和7肽庫(kù).獲得了兩個(gè)優(yōu)勢(shì)序列,同時(shí)合成了相應(yīng)的短肽.通過(guò)ELISA方法和細(xì)胞結(jié)合的方法證實(shí)了所獲得的噬菌體以及合成的短肽能夠與p75NTR相結(jié)合.研究了所獲得的噬菌體以及合成的短肽對(duì)R2L1細(xì)胞去血清后凋亡的抑制作用.本論文在本組前期工作的基礎(chǔ)上,對(duì)應(yīng)用噬菌體展示文庫(kù)篩選TrkA的模擬配基做了初步的研究

3、,完成了以下工作:1.以小鼠骨髓瘤細(xì)胞NSO表達(dá)體系表達(dá)的重組的人TrkA(recombinant humanTrkA,rhTrkA)蛋白為靶蛋白篩選噬菌體隨機(jī)12肽庫(kù),獲得了一個(gè)優(yōu)勢(shì)序列:DSFSPFRIPWPA 2.利用DNA重組技術(shù),構(gòu)建表達(dá)載體,并在大腸桿菌中表達(dá)融合蛋白MBP-TrkA膜外區(qū)蛋白.經(jīng)直鏈淀粉親和柱層析得到較純的融合蛋白.3.通過(guò)ELISA方法證實(shí)了所獲得的噬菌體肽能夠與重組的TrkA膜外區(qū)蛋白相結(jié)合.4.通過(guò)細(xì)