紅曲膠囊對去卵巢合并D-并乳糖誘導大鼠骨質疏松的影響.pdf

1、[目的]：
　　1.檢測紅曲膠囊標志性成分洛伐他汀與輔酶Q10的含量;
　　2.采用大鼠去卵巢合并D-半乳糖誘導的老年性骨質疏松模型評價紅曲膠囊的骨藥理學作用并探討其機制;
　　3.與雌激素己烯雌酚比較，評價紅曲膠囊可否代替雌激素臨床應用于老年性骨質疏松。
　　[方法]：
　　紅曲膠囊標志性成分洛伐他汀與輔酶Q10的含量測定:采用高效液相色譜法對紅曲膠囊中洛伐他汀與輔酶Q10的含量進行測定，并對其精密度、穩(wěn)

2、定性、重復性和回收率進行考察，制定紅曲膠囊檢測洛伐他汀和輔酶Q10含量的質量標準。
　　大鼠去卵巢合并D-半乳糖誘導老年性骨質疏松模型的建立:采用3月齡SPF級雌性SD大鼠，雙側去卵巢，并皮下注射D-半乳糖100 mg·kg-1·d-1，為模型組(MOD);同時設立假手術對照組(CON)，給予蒸餾水灌胃;去卵巢組(OVX)，雙側去卵巢，給予蒸餾水灌胃;已烯雌酚組(DES)，造模后給予已烯雌酚30μg·kg-1·d-1灌胃;和紅曲膠

3、囊組（RYR），造模后給予紅曲膠囊0.5顆/kg/d灌胃給藥，按5 ml·kg-1·d-1灌胃，連續(xù)給藥60天。實驗結束前第13、14天和第3、4天皮下注射鈣黃綠素7 mg·kg-1進行骨熒光標記。大鼠每周稱重一次;實驗結束時，麻醉大鼠后右心室抽血處死大鼠，取血清，檢測總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量;取腦、肝、腓腸肌、比目魚肌稱重，取子宮稱重并做病理切片觀察，取骨標本進行骨藥理學檢測及機制探討。
　　紅曲膠囊骨

4、藥理指標的測定及藥物作用機制的探討:用858 Mini Bionix型材料測試系統(tǒng)分析大鼠右側股骨（三點彎曲實驗）和第五腰椎（壓縮實驗）的生物力學性能使用ICP儀檢測其骨鈣、磷含量，用羥脯氨酸試劑盒檢測骨膠原的含量;用Micro CT對右側股骨和第四腰椎進行骨量分析;用半自動圖像分析系統(tǒng)對第四腰椎和右側脛骨進行不脫鈣包埋的松質骨（脛骨上段、第四腰椎）和皮質骨（脛骨中段）進行骨組織形態(tài)計量學測量。同時，通過免疫組化法對右側股骨下段進行免疫

5、組化染色，觀察PPARγ的表達及脂肪面積的大小，進行機制探討。
　　[結果]：
　　1.紅曲膠囊標志性成分洛伐他汀與輔酶Q10的含量測定:
　　(1)洛伐他汀在15.625μg/ml～250μg/ml濃度范圍內線性關系良好，回歸方程為Y=5.526X-337.02，R2=0.9999。檢測洛伐他汀平均含量為1.31mg/粒，RSD為0.75％;洛伐他汀的平均回收率為101.87％，RSD為1.57％。
　　(2)

6、輔酶Q10在0.96μg/ml～15.42μg/ml濃度范圍內線性關系良好，回歸方程為Y=45423.73X-8975.21，R2=0.9997。檢測輔酶Q10平均含量為6.28μg/粒，RSD為0.96％;輔酶Q10的平均回收率為102.61％，RSD為1.69％。
　　2.紅曲膠囊及各實驗組大鼠一般情況的變化:
　　(1)大鼠體重的變化:實驗結束時，與CON組相比，MOD組的大鼠體重顯著增加（P＜0.01）。與MOD組相

7、比，DES組體重差別無統(tǒng)計學意義，RYR組體重顯著降低（P＜0.01）。與DES組相比，RYR組體重顯著降低（P＜0.01）。
　　(2)大鼠血脂的變化:與CON組相比，MOD組的CHO、LDL顯著增加(P＜0.01)，TG、HDL明顯下降（P＜0.05）。與MOD組相比，DES組的LDL明顯降低(P＜0.05); RYR組的CHO、HDL、LDL均顯著降低（P＜0.01）。
　　(3)大鼠內臟濕重指數(shù)的變化:與CON組相比

8、，MOD組子宮和右腓腸肌的濕重指數(shù)明顯降低(P＜0.05)。與MOD組相比，DES組的子宮指數(shù)顯著增加（P＜0.01）;RYR組子宮指數(shù)有所增加，但差別無統(tǒng)計學意義。
　　(4)大鼠子宮病理切片的變化:CON組子宮飽滿，子宮壁厚;MOD組子宮萎縮，子宮壁薄;DES組與RYR組的子宮厚度均明顯較模型組增加，但RYR組的大鼠子宮增加幅度較小。
　　3.紅曲膠囊及各實驗組大鼠骨生物力學的變化:
　　(1)股骨生物力學的變化:

9、與CON相比，MOD組股骨的最大載荷、剛度、最大強度、斷裂強度、彈性模量均明顯降低（P＜0.05），且斜型斷裂面明顯多。與MOD組相比，DES組的最大載荷、剛度、最大強度均明顯增加(P＜0.05); RYR組的各力學指標均有所增加，但差別無統(tǒng)計學意義。
　　(2)腰椎最大壓縮載荷的變化:與CON組相比，MOD組腰椎的最大壓縮載荷明顯降低（P＜0.05）。與MOD組相比，DES和RYR組的最大壓縮載荷有所增加，但差別均無有統(tǒng)計學意義

10、。
　　4.紅曲膠囊及各實驗組大鼠骨成分的變化:
　　與CON組相比，MOD組股骨的Ca、P、Hyp均顯著降低（P＜0.01）;而與MOD組相比，OVX組的Hyp顯著增加（P＜0.01）;DES組的Hyp顯著增加（P＜0.01）;RYR組Ca、P、Hyp的含量均顯著增加（P＜0.01）。
　　5.紅曲膠囊及各實驗組大鼠骨形態(tài)計量學的變化:
　　(1)脛骨形態(tài)學的變化:與CON組相比，MOD組脛骨的％Tb.Ar、T

11、b.Th、Tb.N和Ct.Ar、％Ct.Ar明顯降低(P＜0.05)，Tb.Sp、％L.Pm、BFR/BV和％Ma.Ar、％P-L.Pm、P-MAR和P-BFR/BS、％E-L.Pm明顯增加(P＜0.05)。與MOD組相比，DES組％Tb.Ar、Tb.Th、Tb.N和％Ct.Ar均顯著增加（P＜0.01），％L.Pm、MAR、BFR/BV和％Ma.Ar、％P-L.Pm、P-BFR/BS均明顯下降(P＜0.05); RYR組％Tb.Ar、

12、Tb.N和％Ct.Ar均顯著增加（P＜0.01），而Tb.Sp、％L.Pm、MAR、BFR/BS、BFR/BV和％Ma.Ar、％P-L.Pm、P-MAR、P-BFR/BS均明顯下降(P＜0.05)。
　　(2)股骨形態(tài)學的變化:與CON組相比，MOD組的Micro CT指標BV/TV、Tb.N、Density、Conn-Dens均顯著降低（P＜0.01），Tb.Sp、SMI均顯著增加（P＜0.01）;與MOD組相比，RYR組的BV

13、/TV、Tb.N、Tb.Th、Density、Conn-Dens均顯著的增加（P＜0.01），Tb.Sp顯著降低（P＜0.01）;而DES組股骨的各項指標趨勢與RYR組相一致;另，與DES組相比，RYR組的BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Conn-Dens明顯升高（P＜0.05），Tb.Sp、SMI明顯降低(P＜0.05)。
　　(3)腰椎形態(tài)學的變化:與CON組相比，MOD組的形態(tài)計量學的％Tb.Ar和Tb.N明顯降低，Tb.

14、Sp、Oc.N和％Oc.Pm、％L.Pm、BVF/BS、BVF/BV、BVF/TV明顯增加（P＜0.05）;與MOD組相比，DES組％Tb.Ar、Tb.Th、Tb.N和Tb.Sp差別均無統(tǒng)計學意義，但％Oc.Pm明顯降低(P＜0.05);RYR組％Tb.Ar、Tb.N均顯著增加(P＜0.01)，Tb.Sp、Oc.N和％Oc.Pm、％L.Pm、BVF/BS、BVF/BV、BVF/TV則顯著下降(P＜0.01);與DES組相比，RYR組的％

15、Tb.Ar、Tb.N顯著增加，和Tb.Sp和Oc.N和％Oc.Pm顯著降低，差別均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。與CON組相比，MOD組的Micro CT指標BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Density、Conn-Dens均顯著下降（P＜0.01），Tb.Sp、SMI顯著增大(P＜0.01);而與MOD組相比，RYR組的BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Density、 Conn-Dens均顯著增加（P＜0.01），Tb.Sp、SM

16、I顯著降低;DES組和RYR組的趨勢一致;與DES組相比，RYR組的Tb.N明顯增加（P＜0.05）。
　　6.紅曲膠囊及各實驗組大鼠股骨PPARγ表達和脂肪面積的變化:
　　CON組股骨下段PPARγ陽性區(qū)域顏色較淺，且數(shù)量較少，而且脂肪空泡較少;MOD組的陽性區(qū)域呈深棕褐色且數(shù)量較多，有大量的空泡狀脂肪細胞，成片狀分布;DES組陽性區(qū)域顏色較淺，且數(shù)量較少，脂肪空泡數(shù)量亦較少;RYR組陽性區(qū)域顏色較淺，但面積較大，而且脂

17、肪空泡數(shù)量較MOD組少。
　　[結論]：
　　1.HPLC方法測得紅曲膠囊中洛伐他汀的平均含量為1.31 mg/粒;輔酶Q10的平均含量為6.28μg/粒。方法靈敏度高，重現(xiàn)性好，回收率高，符合樣品分析要求。
　　2.去卵巢合并D-半乳糖可導致大鼠體重增加，血脂紊亂，股骨和腰椎的力學性能下降，股骨鈣、磷和羥脯氨酸丟失，脛骨、股骨以及腰椎松質骨骨量丟失嚴重，骨顯微結構嚴重退化，脛骨皮質骨的面積減少，可造成老年性骨質疏松。