骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對牙髓損傷的修復(fù)及經(jīng)典Wnt通路在其中的作用的體內(nèi)研究.pdf

1、牙齒在受到外界各種刺激，如齲病、磨耗、外傷等，均可引起牙本質(zhì)缺損，缺損到一定程度會導(dǎo)致牙髓出現(xiàn)一系列抵御刺激的自身修復(fù)反應(yīng)。目前認(rèn)為牙髓干細(xì)胞在牙本質(zhì)-牙髓的損傷修復(fù)中具有非常重要的作用，然而，牙源性干細(xì)胞來源匱乏、擴(kuò)增困難，且已有很多文獻(xiàn)報道了骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMMSCs）可分化為多種細(xì)胞，如成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、皮膚細(xì)胞等，并且在骨、軟骨、肌腱、神經(jīng)、皮膚損傷的修復(fù)中也起著重要作用，BMMSCs已被認(rèn)為是組織再生修

2、復(fù)的重要種子細(xì)胞。目前許多研究證明經(jīng)典Wnt信號通路在早期未分化細(xì)胞的分化、遷移等多方面起著重要作用。
　　牙齒是人體的器官之一，當(dāng)牙髓損傷時，機(jī)體內(nèi)BMMSCs是否參與其修復(fù)以及經(jīng)典Wnt信號通路在其中的作用尚未見報道。本實(shí)驗(yàn)將利用綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞嵌合SD大鼠牙本質(zhì)缺損模型研究BMMSCs在牙髓損傷修復(fù)中的作用，以及經(jīng)典Wnt通路在這一修復(fù)過程中的調(diào)節(jié)作用。
　　實(shí)驗(yàn)分為兩部分：
　　1.BM

3、MSCs與大鼠切牙Apicalbud復(fù)合后腎被膜下移植實(shí)驗(yàn)
　　目的：探討經(jīng)典Wnt信號通路在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向牙本質(zhì)樣分化中的作用。
　　方法：將BMMSCs分為三組：（1）對照組：正常的BMMSCs，不經(jīng)過任何處理；（2）Wnt3a組：BMMSCs經(jīng)100ng/ml濃度的Wnt3a刺激48h；（3）DKK-1組：BMMSCs經(jīng)100ng/ml濃度的DKK-1刺激48h。然后分別與大鼠切牙Apicalbud復(fù)合，移植到大鼠

4、腎被膜下，2周后取材，切片，HE和免疫組化染色觀察。
　　結(jié)果：三組移植物均有牙髓-牙本質(zhì)復(fù)合體樣結(jié)構(gòu)形成，與對照組相比，DKK-1組可見有更多的礦化組織形成，并有較多表達(dá)DMP-1、DSP的細(xì)胞，而wnt3a組僅形成極少的礦化組織，且僅有較少表達(dá)DMP-1、DSP的細(xì)胞。
　　結(jié)論：經(jīng)典Wnt通路可能抑制BMMSCs向成牙本質(zhì)樣細(xì)胞的分化及礦化的形成。
　　2.利用GFP-BMMSCs嵌合SD大鼠牙本質(zhì)缺損模型研究B

5、MMSCs對牙髓損傷的修復(fù)以及經(jīng)典Wnt通路的調(diào)節(jié)作用
　　目的：探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是否參與牙髓損傷的修復(fù)以及經(jīng)典Wnt通路在這一過程中的調(diào)節(jié)作用。
　　方法：利用綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（GFP-BMMSCs）嵌合SD大鼠模型，實(shí)驗(yàn)分為三組：（1）對照組：經(jīng)尾靜脈所注射的GFP-BMMSCs為正常細(xì)胞，不經(jīng)過任何刺激;（2）Wnt3a組：尾靜脈所注射的GFP-BMMSCs經(jīng)100ng/ml濃度的Wnt3a刺

6、激48h;（3）DKK-1組:尾靜脈所注射的GFP-BMMSCs經(jīng)100ng/ml濃度的DKK-1刺激48h。通過制備牙本質(zhì)缺損構(gòu)建牙髓損傷模型，于牙本質(zhì)缺損5d,10d,15d后取材，切片，HE及免疫熒光染色，分別觀察牙髓的病理變化和損傷修復(fù)情況以及GFP-BMMSCs在牙髓組織中的分布情況和變化。
　　結(jié)果：（1）牙本質(zhì)缺損組初期有牙髓充血，后期有修復(fù)性牙本質(zhì)形成，免疫熒光染色可見牙髓組織中有熒光細(xì)胞的分布，且牙本質(zhì)缺損組比正