黃芪及其提取物對體外培養(yǎng)大鼠肺成纖維細(xì)胞增殖及TGF-β、HGF表達(dá)的影響.pdf

1、目的:本研究以中醫(yī)學(xué)理論為指導(dǎo)，采用現(xiàn)代中藥藥理學(xué)研究方法，探討黃芪及其提取物對體外培養(yǎng)大鼠肺成纖維細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)、肝細(xì)胞生長因子(HGF)表達(dá)的影響。為開發(fā)黃芪有效成分運(yùn)用于臨床防治肺纖維化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:SPF級wistar大鼠60只，雌雄各半，體重180±20g，根據(jù)現(xiàn)代中藥藥理學(xué)方法分組制備含藥血清。分離、培養(yǎng)并鑒定大鼠肺成纖維細(xì)胞，取第3-5代生長良好者，隨機(jī)分為6組：黃芪煎液組，黃芪總

2、皂苷組，黃芪總黃酮組，黃芪多糖組，地塞米松對照組，空白對照組，加入各組相應(yīng)血清。免疫組化法鑒定肺成纖維細(xì)胞；臺盼藍(lán)排斥試驗(yàn)法測定細(xì)胞活力；MTT法檢測黃芪及其提取物對肺成纖維細(xì)胞增殖的影響；免疫組化法檢測黃芪及其提取物對肺成纖維細(xì)胞中TGF-β、HGF表達(dá)的影響。 結(jié)果:細(xì)胞鑒定：波形蛋白表達(dá)陽性，結(jié)合組織來源與細(xì)胞生物學(xué)特性確認(rèn)為肺成纖維細(xì)胞。細(xì)胞活力測定：細(xì)胞活力>95％。MTT試驗(yàn)：與空白對照組比較：48～96h時(shí)，各藥物

3、組均能明顯抑制肺成纖維細(xì)胞增殖(P<0.01)。藥物作用時(shí)間在24～72h抑制強(qiáng)度隨時(shí)間延長而加強(qiáng)，96h時(shí)抑制率未能進(jìn)一步增加，呈飽和效應(yīng)動力學(xué)特征。72h時(shí)各藥物組對細(xì)胞增殖的抑制作用最強(qiáng)(P<0.01)，且黃芪煎液組、黃芪總皂苷組及黃芪總黃酮組的抑制作用強(qiáng)于黃芪多糖組(P<0.01)，其抑制率分別達(dá)到了：黃芪煎液組43.61％，黃芪總皂苷組38.81％，黃芪總黃酮組39.50％，黃芪多糖組28.31％。免疫組化試驗(yàn)：與空白對照組比

4、較：黃芪煎液組、黃芪總皂苷組及黃芪總黃酮組細(xì)胞胞漿TGF-β、HGF的表達(dá)均有顯著性差異(P<0.01)，黃芪多糖組及地塞米松組均有差異(P<0.05)；與地米對照組比較：黃芪煎液組、黃芪總皂苷組及黃芪總黃酮組TGF-β、HGF的表達(dá)均有差異(P<0.05)，黃芪多糖組無明顯差異(P>0.05)；且黃芪煎液組、黃芪總皂苷組及黃芪總黃酮組的作用均優(yōu)于黃芪多糖組(P<0.05)。 結(jié)論:黃芪及其提取物含藥血清均能抑制體外培養(yǎng)大鼠肺成