SRF基因沉默對(duì)TGF-β-,1-刺激下人肺成纖維細(xì)胞增殖及α-SMA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：肺纖維化過程中，在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（Transforming Growth Factor beta，TGF-β1）刺激下，成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槌杉±w維細(xì)胞的重要標(biāo)志是α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的表達(dá)。 為研究血清應(yīng)答因子（serum response factor，SRF）在α-SMA表達(dá)調(diào)節(jié)機(jī)制中的作用，本實(shí)驗(yàn)利用基因沉默的方法，觀察目的基因SRF沉默后，對(duì)TGF-β1作用下

2、的人肺成纖維細(xì)胞增值及α-SMA表達(dá)的影響，從而探討SRF在人肺成纖維細(xì)胞表形轉(zhuǎn)化過程中的作用。 方法： 構(gòu)建分別含有SRF1、SRF2、SRF3干擾序列的三種質(zhì)粒表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染人肺成纖維細(xì)胞（MRC-5），通過定量PCR及Western-blot方法檢測(cè)目的基因SRFmRNA及其蛋白的表達(dá)，篩選出最佳干擾序列SRF3；將SRF3重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MRC-5后，給予TGF-β1刺激，在特定時(shí)間點(diǎn)和一定時(shí)間內(nèi)分別用MTT法和We

3、stern-blot方法測(cè)定細(xì)胞增殖抑制率和細(xì)胞內(nèi)α-SMA的表達(dá)。 結(jié)果： 與非特異Genesil-siRNA陰性對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的MRC-5細(xì)胞或未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的MRC-5細(xì)胞相比，SRF3-siRNA表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的MRC-5細(xì)胞SRF的mRNA量及蛋白表達(dá)量均明顯降低；TGF-β1干擾后MRC-5細(xì)胞的增殖亦受到明顯抑制；TGF-β1刺激24 h后，細(xì)胞內(nèi)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)量明顯下降。 結(jié)論： 1.在T