內(nèi)源性孤啡肽對大鼠急性心肌缺血引起的心律失常的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、急性心肌梗死引起的嚴(yán)重的室性心律失常已成為造成心源性猝死的主要原因。孤啡肽（nociceptin，Orphanin FQ，OFQ）屬于G蛋白耦聯(lián)受體是神經(jīng)肽的一種。應(yīng)用孤啡肽在外周及中樞可均引起程度一定的心率減慢和血壓下降，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)孤啡肽除與參加外周和中樞神經(jīng)對調(diào)節(jié)心血管有關(guān)外，還可能與其對心血管直接作用有關(guān)。本小組前期研究發(fā)現(xiàn)，在大鼠急性心肌缺血模型中OFQ表達(dá)上調(diào)出現(xiàn)在脊髓和背根神經(jīng)節(jié)。提示在急性心肌缺血病理過程中可能有孤啡肽參

2、與，但是對尚不清楚其具體作用機(jī)制。心律失常是否由孤啡肽直接調(diào)節(jié)？需要進(jìn)一步研究。
　　目的：研究內(nèi)源性孤啡肽對急性心肌缺血大鼠心律失常的影響及其可能機(jī)制，為臨床研究及干預(yù)急性心肌缺血病理過程提供新的思路及靶點(diǎn)。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)從三個(gè)方面進(jìn)行研究
　　1．大鼠尾靜脈注射孤啡肽受體拮抗劑UFP-IOI對內(nèi)源性孤啡肽作用進(jìn)行在體研究：健康大鼠分為空白對照組（靜脈給予生理鹽水，C）、不同濃度UFP-IOI組（lxlO'llm

3、ol/kg，lx10-9mol/kg and lx10-7mol/kg，Ull，U9，U7）。各組尾靜脈給藥5分鐘后開胸結(jié)扎冠狀動(dòng)脈，記錄分析結(jié)扎后一小時(shí)心律失常的變化。
　　2．孤啡肽對心肌細(xì)胞的動(dòng)作電位時(shí)程(APD)影響的研究：采用膜片鉗技術(shù)，急性分離成年SD大鼠心肌細(xì)胞，分別用含有不同濃度的OFQ lx l0-11 mol/L，lx10-9mol/L and lx10-7mol/L,(Oll,09,07; N=6); OFQ

4、(lx10-9 mol/L)+ufp-101(lx10-8 mol/L)(09U8; N=6)和UFP-I01(lx10-8 mol/L，U8; n=6)的臺(tái)式液持續(xù)灌流心肌細(xì)胞對運(yùn)用全細(xì)胞膜片鉗模式觀察對APD的影響，以探討孤啡肽對心律失常作用可能的機(jī)制。
　　3．內(nèi)源性孤啡肽調(diào)節(jié)急性心肌缺血后室性心律失常發(fā)生的作用與PKC通路的關(guān)系：利用第一部分實(shí)驗(yàn)的心肌標(biāo)本提取心肌細(xì)胞蛋白，采用PKC活性分析試劑盒測定其活化程度；選擇UFP

5、-IOI（lx10-7mol/kg）與PKC拮抗劑Calphostin C(0.1 mg/kg)配伍尾靜脈給藥5分鐘后開胸結(jié)扎冠狀動(dòng)脈，記錄分析結(jié)扎后一小時(shí)心律失常的變化，以探討孤啡肽作用可能的分子機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1．與對照組比較，靜脈給予UFP-I01，能明顯降低CAO（急性冠脈結(jié)扎）后室性心律失常的發(fā)生。從時(shí)間分布看，UFP-101對心律失常的作用主要發(fā)生在結(jié)扎15分鐘后。
　　2．膜片鉗實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，孤啡