內(nèi)源性孤啡肽對大鼠急性心肌缺血引起的心律失常的影響及其機制研究.pdf

1、急性心肌梗死引起的嚴重的室性心律失常已成為造成心源性猝死的主要原因。孤啡肽（nociceptin，Orphanin FQ，OFQ）屬于G蛋白耦聯(lián)受體是神經(jīng)肽的一種。應用孤啡肽在外周及中樞可均引起程度一定的心率減慢和血壓下降，相關研究發(fā)現(xiàn)孤啡肽除與參加外周和中樞神經(jīng)對調(diào)節(jié)心血管有關外，還可能與其對心血管直接作用有關。本小組前期研究發(fā)現(xiàn)，在大鼠急性心肌缺血模型中OFQ表達上調(diào)出現(xiàn)在脊髓和背根神經(jīng)節(jié)。提示在急性心肌缺血病理過程中可能有孤啡肽參

2、與，但是對尚不清楚其具體作用機制。心律失常是否由孤啡肽直接調(diào)節(jié)？需要進一步研究。
　　目的：研究內(nèi)源性孤啡肽對急性心肌缺血大鼠心律失常的影響及其可能機制，為臨床研究及干預急性心肌缺血病理過程提供新的思路及靶點。
　　方法：本實驗從三個方面進行研究
　　1．大鼠尾靜脈注射孤啡肽受體拮抗劑UFP-IOI對內(nèi)源性孤啡肽作用進行在體研究：健康大鼠分為空白對照組（靜脈給予生理鹽水，C）、不同濃度UFP-IOI組（lxlO'llm

3、ol/kg，lx10-9mol/kg and lx10-7mol/kg，Ull，U9，U7）。各組尾靜脈給藥5分鐘后開胸結扎冠狀動脈，記錄分析結扎后一小時心律失常的變化。
　　2．孤啡肽對心肌細胞的動作電位時程(APD)影響的研究：采用膜片鉗技術，急性分離成年SD大鼠心肌細胞，分別用含有不同濃度的OFQ lx l0-11 mol/L，lx10-9mol/L and lx10-7mol/L,(Oll,09,07; N=6); OFQ

4、(lx10-9 mol/L)+ufp-101(lx10-8 mol/L)(09U8; N=6)和UFP-I01(lx10-8 mol/L，U8; n=6)的臺式液持續(xù)灌流心肌細胞對運用全細胞膜片鉗模式觀察對APD的影響，以探討孤啡肽對心律失常作用可能的機制。
　　3．內(nèi)源性孤啡肽調(diào)節(jié)急性心肌缺血后室性心律失常發(fā)生的作用與PKC通路的關系：利用第一部分實驗的心肌標本提取心肌細胞蛋白，采用PKC活性分析試劑盒測定其活化程度；選擇UFP

5、-IOI（lx10-7mol/kg）與PKC拮抗劑Calphostin C(0.1 mg/kg)配伍尾靜脈給藥5分鐘后開胸結扎冠狀動脈，記錄分析結扎后一小時心律失常的變化，以探討孤啡肽作用可能的分子機制。
　　結果：
　　1．與對照組比較，靜脈給予UFP-I01，能明顯降低CAO（急性冠脈結扎）后室性心律失常的發(fā)生。從時間分布看，UFP-101對心律失常的作用主要發(fā)生在結扎15分鐘后。
　　2．膜片鉗實驗結果顯示，孤啡