p300和HDAC1相互調(diào)節(jié)RORγt乙酰化和功能.pdf

1、輔助性T細胞17（T helper cells17，Th17 cell）是近年來新發(fā)現(xiàn)的不同于Th1、Th2和調(diào)節(jié)性T細胞（Regulatory T cells，Treg）的一群CD4+T細胞亞群。因其主要分泌白細胞介素-17（Interleukin17，IL-17），被命名為Th17細胞。IL-17在組織炎癥中主要通過誘導(dǎo)炎癥細胞因子和趨化因子的產(chǎn)生而發(fā)揮作用，如 IL-6和CXCL8等。由于IL-17很強的前炎癥因子作用，Th17細

2、胞與多種自身免疫性疾病和感染性疾病的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic lupus erythematous，SLE）、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)、多發(fā)性硬化癥(Multiple sclerosis，MS)、炎癥性腸炎(Inflammatory bowel disease，IBD)、銀屑病（Psoriasis）以及橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto’s thyroiditis，HT)

3、等。
　　維甲酸相關(guān)孤兒核受體（Retinoid-related orphan receptor gammat,RORγt）是Th17細胞最重要的關(guān)鍵核轉(zhuǎn)錄因子，和其他轉(zhuǎn)錄因子一起協(xié)同促進Th17細胞的分化，如RORα、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子與轉(zhuǎn)錄激活子（Signal transducer and activator of transcription3，STAT3）、白細胞介素調(diào)節(jié)因子4（Interferon regulatory facto

4、r4，IRF4）、Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子（Runt-related transcription factor1，Runx1）、芳香烴受體（Aryl hydrocarbon receptor，AHR）以及B細胞活化轉(zhuǎn)錄因子（B cell-activating transcription factor，BATF）等。另外，T轉(zhuǎn)化生長因子-β（Transforming growth factor-β，TGF-β），IL-6，IL-23和IL-1

5、β是Th17細胞分化和增殖的必要生長因子，并且可以促進IL-17，IL-23受體（Interleukin23 receptor，IL-23R）以及RORγt的表達。
　　在生物體內(nèi)，組蛋白乙?；徒M蛋白去乙酰化處于動態(tài)平衡，精確地調(diào)控基因的表達和轉(zhuǎn)錄，從而維持細胞的正常生理和生化過程。乙?；▽M蛋白的乙?；约稗D(zhuǎn)錄因子的乙?；?，其中通過修飾轉(zhuǎn)錄因子可以影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，亞細胞定位以及 DNA的結(jié)合能力。另外，在生物體內(nèi)，泛素

6、化修飾在蛋白質(zhì)的降解、定位、代謝和功能方面也起著十分重要的作用，它參與了細胞增殖、分化、凋亡、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄控制、DNA修復(fù)和免疫應(yīng)答等細胞調(diào)控。
　　Th17細胞的關(guān)鍵核轉(zhuǎn)錄因子 RORγt的表達、翻譯后修飾狀態(tài)及其活性的調(diào)節(jié)決定著Th17細胞的免疫活性。然而RORγt如何調(diào)節(jié)仍舊不是十分清楚。本研究首先通過免疫沉淀檢測到在人源 Th17細胞存在乙?；?RORγt，而且這種乙?；饔迷诮M蛋白去乙酰化酶抑制劑存在的情況下更為顯著

7、；免疫共沉淀證實在人源Th17細胞組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶（Histon acetyltransferase,HATs）p300可以和RORγt相互作用；免疫印跡結(jié)果發(fā)現(xiàn)p300可以穩(wěn)定RORγt的蛋白水平且呈劑量依賴性；應(yīng)用免疫沉淀實驗證實 p300可以乙?；?RORγt，且乙?；奈稽c主要在RORγt的第81位的賴氨酸。此外，應(yīng)用Ni-NTA鎳螯合樹脂純化實驗發(fā)現(xiàn)p300可以泛素化RORγt，泛素化的位點主要在RORγt的第258位的賴氨酸

8、，且p300泛素化 RORγt蛋白主要針對63位賴氨酸相關(guān)的泛素化；利用基因沉默方法（shRNA）在人源Th17細胞中消減p300后，減少RORγt蛋白水平以及RORγt有關(guān)的基因表達；利用熒光素酶報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果發(fā)現(xiàn)p300上調(diào)了RORγt介導(dǎo)的IL-17表達且為劑量依賴性。更為有趣的是，組蛋白去乙?；福℉iston deacetylase，HDACs）HDAC1也可以與 RORγt相互作用，同時可以去乙?；疪ORγt。另外，HDA