p300介導(dǎo)乙酰化修飾與心臟發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá).pdf

1、目的：本研究通過檢測(cè)小鼠胚胎心臟發(fā)育過程中GATA4、MEF2C、Nkx2.5和Tbx5基因轉(zhuǎn)錄水平的動(dòng)態(tài)表達(dá)和這些基因啟動(dòng)子區(qū)組蛋白H3乙?；降淖兓?，以及組蛋白乙?；竵喰蚿300是否參與調(diào)控上述四種心臟發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)，從表觀遺傳組蛋白乙?；揎椀慕嵌?，初步探討胚胎心臟發(fā)育過程中多基因時(shí)序表達(dá)的染色質(zhì)重塑調(diào)控模式，為進(jìn)一步研究先天性心臟疾病的發(fā)生機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)。
　　 材料與方法：選取胎齡10.5天和16.5天昆明小

2、鼠正常胚胎心臟，用基于SYBR GREENⅠ的熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitativepolymerase chain reaction，Q-PCR）方法觀察GATA4、MEF2C、Nkx2.5和Tbx5基因mRNA的動(dòng)態(tài)表達(dá)；采用染色質(zhì)免疫沉淀（Chromatinimmunoprecitation，ChIP）技術(shù)，分別用ChIP級(jí)抗乙?；慕M蛋白H3抗體和抗p300抗體免疫沉淀與其所結(jié)合的DNA，設(shè)計(jì)針對(duì)心臟發(fā)育相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)

3、的DNA引物，用Q-PCR的方法擴(kuò)增抗體所富集的上述基因啟動(dòng)子。DNA，觀察胚胎心臟發(fā)育過程中組蛋白乙?；郊敖M蛋白乙酰化酶亞型p300是否參與調(diào)控上述四種心臟特異轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4、MEF2C、Nkx2.5和Tbx5基因mRNA表達(dá)水平在心臟發(fā)育的不同階段（胎齡10.5天和16.5天）呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化，其中GATA4、MEF2C基因mRNA相對(duì)β-actin的表達(dá)水平，E

4、10.5明顯低于E16.5（P<0.01），而Nkx2.5、Tbx5 mRNA相對(duì)表達(dá)水平，E10.5明顯高于E16.5（P<0.05）。
　　 2.染色質(zhì)免疫沉淀（CHIP）分析顯示，胎齡10.5天和16.5天小鼠胚胎心臟組織中，這些基因啟動(dòng)子區(qū)存在著組蛋白H3的乙?；降牟町悾町悷o統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。其中Nkx2.5、MEF2C和Tbx5基因啟動(dòng)子區(qū)組蛋白乙?；阶兓厔?shì)與相應(yīng)基因的mRNA表達(dá)水平變化趨勢(shì)相

5、一致。同時(shí)，染色質(zhì)免疫共沉淀檢測(cè)結(jié)果顯示p300與GATA4，Nkx2.5，MEF2C和Tbx5基因啟動(dòng)子通過某種方式相互結(jié)合?？筽300抗體免疫沉淀的上述基因啟動(dòng)子DNA量在這兩個(gè)小鼠心臟發(fā)育的關(guān)鍵階段有所不同，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 數(shù)據(jù)表明，心臟特異轉(zhuǎn)錄因子的動(dòng)態(tài)表達(dá)可能是通過調(diào)節(jié)相應(yīng)基因啟動(dòng)子區(qū)組蛋白H3的乙?；瘉砑せ罨騿?dòng)子實(shí)現(xiàn)的，p300可能參與了這一過程。這些結(jié)果提示p3