HDAC抑制劑對LS174T細(xì)胞組蛋白乙?；癆SC基因表達(dá)的作用.pdf

1、目的：基因的正常表達(dá)與調(diào)控是機(jī)體正常生長發(fā)育所必需的。日益增多的實(shí)驗表明，染色質(zhì)和核小體構(gòu)型的改變在基因轉(zhuǎn)錄起始過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。核心組蛋白的乙?；腿ヒ阴；c基因調(diào)控密切相關(guān)，目前主要由組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶（HAT）和組蛋白去乙?；福℉DAC）負(fù)責(zé)組蛋白乙?；腿ヒ阴；?，它們是兩類功能相互拮抗的蛋白酶。組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶可乙?；M蛋白氨基末端、使核小體結(jié)構(gòu)松散并激活基因轉(zhuǎn)錄；而組蛋白去乙?；妇哂邢喾吹墓δ?，抑制基因轉(zhuǎn)錄。特定基

2、因的表達(dá)與否取決于定位于靶基因啟動子上轉(zhuǎn)錄因子的乙?；癄顟B(tài)，并組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶和組蛋白去乙?；富钚灾g的動態(tài)平衡所調(diào)控。組蛋白去乙?；甘钦{(diào)控基因表達(dá)的關(guān)鍵蛋白酶，其功能異常與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有直接關(guān)系。通過抑制組蛋白去乙?；傅幕钚钥梢杂行е委熌[瘤。組蛋白去乙?；敢种苿╤istone deacetylase inhibitors，HDACi）能抑制HDAC的活性，并改變組蛋白或轉(zhuǎn)錄因子的乙?；癄顟B(tài)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞生長停滯、分化或凋

3、亡，具有明顯的抗腫瘤活性。 目前，結(jié)腸癌是高危性消化道惡性腫瘤，發(fā)病率已位列常見腫瘤第四位，僅次于肺、胃、肝癌，屬常見惡性腫瘤。2008年其發(fā)病率占上海市惡性腫瘤第二位，而且近年發(fā)病率上升趨勢十分明顯。據(jù)統(tǒng)計，我國結(jié)腸癌的發(fā)病率上升速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過2%的國際水平，直逼5%。每年新發(fā)病例高達(dá)40萬，主要以中年人為主，其高發(fā)年齡在50歲以上。因此，對結(jié)腸癌的發(fā)病機(jī)理和臨床治療的研究受到學(xué)者的普遍關(guān)注。 ASC最先是作為一種去污劑

4、不溶解蛋白而被發(fā)現(xiàn)的，其參與視黃酸誘導(dǎo)的凋亡，并在細(xì)胞內(nèi)形成鎢絲結(jié)構(gòu)。ASC可以認(rèn)為是一種腫瘤抑制基因，參與細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)，炎癥胱天蛋白酶和NF-κB的激活等。許多上皮細(xì)胞和白細(xì)胞、毛囊、外周血淋巴細(xì)胞都充分表達(dá)ASC，免疫組化研究表明在嚴(yán)重的炎癥部位中性粒細(xì)胞ASC表達(dá)顯著升高。ASC表達(dá)可在基因水平進(jìn)行調(diào)節(jié)，主要是通過增強(qiáng)子甲基化和組蛋白乙?；瘜?shí)現(xiàn)的。據(jù)報道，在人乳腺癌細(xì)胞中ASC會有異常甲基化或沉默。另外，在白血病、膽管癌、結(jié)腸癌

5、、前列腺癌等腫瘤中也異常表達(dá)，因此引起學(xué)術(shù)界的普遍關(guān)注。 本次實(shí)驗作者主要研究去乙?；敢种苿┒∷徕c（sodiumbutyrate，NaBu）對人結(jié)腸癌LS174T細(xì)胞中的組蛋白H3乙?；揭约皩σ职┗駻SC表達(dá)的影響，從而探討丁酸鈉在細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)和結(jié)腸癌治療中的可行性。 方法：劑量組使用1、5、10mmol/L濃度的NaBu分別作用LS174T細(xì)胞24小時，時間組使用5mmol/LNaBu作用LS174T細(xì)胞12、

6、24、48、72小時。提取細(xì)胞的mRNA和總蛋白，采用RT-PCR技術(shù)檢測ASC基因表達(dá)情況，同時使用免疫印跡技術(shù)（Westernblot）檢測組蛋白H3的乙?；郊癆SC蛋白的表達(dá)情況。MTT用于檢測細(xì)胞增殖率，并使用DAPI染色和AnnexinV-FITC方法測定細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果：隨著NaBu作用濃度的增加組蛋白H3乙?；潭炔粩嘣黾?，使用相同濃度NaBu作用細(xì)胞不同時間時，結(jié)果顯示藥物作用時間與組蛋白的乙?；潭瘸收?/p>