楊樹中MAX2同源基因的克隆.pdf

1、分枝為植物非常復雜的生理發(fā)育過程，涉及到多種生理機制，植物激素對分枝的影響是其中重要的一環(huán)。2008年發(fā)現(xiàn)了一類新型植物激素——獨腳金內(nèi)酯(strigolactone，SLs)，其功能為參與調(diào)控植物地上部分分枝。當前，關于獨腳金內(nèi)酯調(diào)控分枝的機理機制研究已取得一定進展，在擬南芥（Arabi-dopsis thaliana）、水稻（Oryza sativa）、豌豆（Pisum sativum L.）、矮牽牛(petunia hybrida

2、)等物種中已克隆出許多與獨腳金內(nèi)酯相關的基因。但至今獨腳金內(nèi)酯的合成和信號傳導的具體途徑尚不清晰，在不同物種中已克隆的基因亦有限，特別是其在木本植物中的作用機制還處于起步階段。而楊樹作為木本植物中的模式植物，探究獨腳金內(nèi)酯對其分枝機理的具影響有重要意義。
　　本實驗通過生物信息學方法，調(diào)取11個擬南芥與獨腳金內(nèi)酯合成及信號轉導相關的基因，比對出其在毛果楊（Populus trichocarpa）中對應的同源基因，對篩選出的毛果楊獨

3、腳金內(nèi)酯各途徑的同源基因，分析各基因的功能及表達情況，挑選出擬南芥及毛果楊獨腳金內(nèi)酯信號轉導途徑中MAX2的同源基因為目的基因進行克隆。
　　目前，實驗部分使用Gateway方法已克隆出AtMAX2基因(AT2G42620)，同時將AtMAX2基因在Col-0型擬南芥中過量表達;同時，以歐洲山楊×銀白楊（Populus tremula×P.Alba INRA clone N7171-B4）組培苗為植物材料，將AtMAX2在717楊

4、樹中過量表達;克隆出楊樹中MAX2的同源基因PtrMAX2c（Potri.006G068500）。
　　構建已轉化AtMAX2到717楊，已鑒定出陽性植株;構建已轉化PtrMAX2c基因到Col-0型擬南芥中，已得到PtrMAX2c轉AT_T1代種子;經(jīng)過3代擬南芥植株的陽性苗篩選及RT-PCR表達量鑒定，已得到AtMAX2轉Col-0型擬南芥過量表達轉基因植株的純合子株系9個;通過陽性苗篩選篩選及RT-PCR表達量鑒定，篩選出A