先天巨結(jié)腸腸神經(jīng)系統(tǒng)和Cajal間質(zhì)細(xì)胞整體封藏制備研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文先天巨結(jié)腸腸神經(jīng)系統(tǒng)和Cajal間質(zhì)細(xì)胞整體封藏制備研究姓名：郝晶申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：兒科學(xué)指導(dǎo)教師：李心元20040401結(jié) 果采用本實(shí)驗(yàn)固定標(biāo)本方法，標(biāo)本收縮程度小，在W M P 操作分離容易。經(jīng)H E 檢查分段準(zhǔn)確，利于確定E N S 在I - I D 整體表現(xiàn)。免疫組化染色前用T r i t o nX 一1 0 0 和復(fù)合消化酶處理標(biāo)本使抗原暴露而利于染色。對(duì)S A B C 法染色步驟進(jìn)行調(diào)整，增加第

2、一抗體總量，降低濃度，延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，使背景染色低，目標(biāo)染色強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)采用的自制玻璃硅膠載玻片適合于腸管W M P標(biāo)本的染色操作。H D 腸管正常段、擴(kuò)張段、移行段和狹窄段等各段肌間及粘膜下神經(jīng)纖維S 1 0 0 均表達(dá)，呈棕黃或棕褐色；c 一垃在H D 正常段及擴(kuò)張段腸管呈陽性，而狹窄段則為陰性，免疫組化染色陰性對(duì)照元染色，此染色法可用于W N P 腸標(biāo)本神經(jīng)叢和I C C s 的標(biāo)記來觀察它們整體形態(tài)和分布。H D 正常段結(jié)腸肌間和粘

3、膜下層存在較豐富神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，S 1 0 0 免疫組化：縱行肌和環(huán)行肌之間有均勻分布的神經(jīng)纖維和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞集簇，神經(jīng)纖維均勻一致無粗大改變，分支互相交織成竹簍樣結(jié)構(gòu)；粘膜下層隱窩周圍有均勻的神經(jīng)纖維網(wǎng)；c —k i t 陽性I C C s 胞體及其突起形成篩網(wǎng)。狹窄段肌間和粘膜下層無神經(jīng)節(jié)細(xì)胞?？v行肌層內(nèi)面存在粗大神經(jīng)束沿腸管縱軸方向走行，扭曲紊亂，分支少而不均勻，分支之間互相聯(lián)系少；粘膜下層陷窩周圍無均勻神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)；肌間c —k i t

4、陰性。移行段肌間和粘膜下層存在少量神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，肌間和粘膜下神經(jīng)纖維仍粗大，但分支增多，互相聯(lián)系增加。擴(kuò)張段與正常段相近，只是由于腸管擴(kuò)張而較分散。結(jié) 論1 ．W M P 結(jié)合免疫組織化學(xué)是觀察E N S 及I C C s 三維結(jié)構(gòu)的良好方法。為E N S 生理和病理基礎(chǔ)研究提供了新思路。2 ．自制的硅膠載玻片適用于胃腸道W M P 標(biāo)本染色操作，且簡(jiǎn)便易得。3 ．H D 的痙攣段與正常段腸神經(jīng)叢神經(jīng)纖維整體形態(tài)存在顯著差別，肌間神經(jīng)神經(jīng)