從虎杖中酶法提取白藜蘆醇的工藝研究.pdf

1、以天然植物虎杖為原料提取白藜蘆醇的生產(chǎn)工藝研究是當(dāng)今生物制劑研發(fā)的重要課題之一。白藜蘆醇在虎杖中以糖苷形式存在。在實(shí)際的提取生產(chǎn)過(guò)程當(dāng)中，存在諸如：發(fā)酵效果不理想，白藜蘆醇提取率較低，生產(chǎn)周期長(zhǎng)等一系列問(wèn)題。為了克服生產(chǎn)過(guò)程出現(xiàn)的不足與困難，本文對(duì)虎杖中白藜蘆醇的提取工藝進(jìn)行重點(diǎn)研究，同時(shí)還對(duì)提取物粗品中白藜蘆醇的檢測(cè)和分離開(kāi)展了較系統(tǒng)的研究工作。
　　研究建立了HPLC定量檢測(cè)白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的方法，用Agilent，Ecl

2、ipse XDB－C18反相色譜柱，以乙腈-水作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。采用外標(biāo)法建立白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的標(biāo)準(zhǔn)加入工作曲線，白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合結(jié)果為：白藜蘆醇苷標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合結(jié)果為：檢測(cè)結(jié)果線性擬合度較高，結(jié)果較精確。最后，利用 HPLC法測(cè)定了天然植物虎杖中白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的初始含量，其中白藜蘆醇質(zhì)量含量為0.444％，白藜蘆醇苷質(zhì)量含量為2.076%。
　　虎杖中白藜蘆醇提取工藝則采用直接酶解——醇提結(jié)合方法，通過(guò)單因素試

3、驗(yàn)選擇關(guān)鍵影響因素并進(jìn)行響應(yīng)面分析，確定了虎杖酶解的最優(yōu)提取工藝為：200目的虎杖，在固液比為1:20（g:ml），酶解溫度約42℃，NaAc-HAc緩沖溶液的pH值約為4.72，纖維素酶添加量為1:500(g酶:g虎杖原料)，恒溫?cái)嚢璺磻?yīng)22h，反應(yīng)后的固體殘?jiān)?，?:10（g:ml）量的甲醇溶劑重復(fù)提取4次，每次提取10min。對(duì)白藜蘆醇的提取率影響順序先后分別為：B.酶解溫度>A.纖維素酶添加量>C.酶解pH值，其中酶解溫度對(duì)模型