全反式維甲酸增強(qiáng)順鉑對(duì)A549細(xì)胞化療敏感性及其對(duì)bcl-2和P53基因表達(dá)的影響.pdf

1、肺癌在現(xiàn)代社會(huì)中的患病率和死亡率越來(lái)越高，已成為危害人類(lèi)健康的頭號(hào)殺手，逐年增加的發(fā)病率和病死率越來(lái)越引起醫(yī)務(wù)工作者甚至廣大社會(huì)人群的重視。關(guān)于肺癌發(fā)病機(jī)制及新興治療方案的研究越來(lái)越深入，人們逐漸認(rèn)識(shí)到腫瘤的發(fā)生發(fā)展與機(jī)體凋亡機(jī)制障礙密切相關(guān)。全反式維甲酸(all-trans retinoic acid，ATRA)能有效抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分化、凋亡，在抗腫瘤方面具有獨(dú)到優(yōu)勢(shì)。關(guān)于ATRA誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡的具體機(jī)制已有研究，但

2、仍缺乏統(tǒng)一的觀點(diǎn)，現(xiàn)在已公認(rèn)bcl-2及P53基因在凋亡過(guò)程中發(fā)揮扮演著不可替代的重要角色，關(guān)于二者對(duì)凋亡過(guò)程的影響機(jī)制已基本明晰。
　　目前，中晚期肺癌患者仍以化療為主，鉑類(lèi)聯(lián)合其他化療藥物仍是晚期非小細(xì)胞肺癌標(biāo)準(zhǔn)一線化療方案，但鉑類(lèi)所致不良反應(yīng)較多，除具有較嚴(yán)重的胃腸道反應(yīng)、腎毒性、耳毒性、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷等不良反應(yīng)外，還可造成DNA損傷修復(fù)基因表達(dá)異常、凋亡抑制因子表達(dá)異常、凋亡信號(hào)傳導(dǎo)異常等，限制了其應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)AT

3、RA聯(lián)合順鉑(cisplatin，DDP)作用于人肺腺癌A549細(xì)胞株，探討其對(duì)肺癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響，同時(shí)檢測(cè)不同藥物干預(yù)后A549細(xì)胞bcl-2及野生型P53基因的表達(dá)情況，以探討ATRA促進(jìn)細(xì)胞凋亡的機(jī)制，同時(shí)驗(yàn)證ATRA聯(lián)合順鉑是否能提高后者的化療作用，從而促進(jìn)ATRA臨床推廣應(yīng)用。
　　目的:
　　通過(guò)體外研究探討ATRA聯(lián)合DDP對(duì)肺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡的影響及其可能機(jī)制。
　　方法:
　　1.

4、常規(guī)培養(yǎng)肺癌A549細(xì)胞，將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的對(duì)數(shù)期肺癌細(xì)胞分為ATRA組、DDP組、ATRA+DDP組及對(duì)照組四組，采用四甲基偶氮唑法(Mosmann Tetrozolium Test，MTT)法分別檢測(cè)作用于細(xì)胞24h、48h、72h后的吸光度值，計(jì)算在各時(shí)間段各實(shí)驗(yàn)組藥物對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率。
　　2.利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同藥物干預(yù)后A549細(xì)胞的凋亡比率。
　　3.應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)ATRA組、DDP組、ATRA+D

5、DP組及對(duì)照組bcl-2及野生型P53基因的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)可觀察到，藥物干預(yù)細(xì)胞生長(zhǎng)24h、48h、72h時(shí)，與對(duì)照組比較，ATRA組、順鉑組及兩藥聯(lián)合組的吸光度值均明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在ATRA組及聯(lián)合組，細(xì)胞生長(zhǎng)24h、48h、72h不同時(shí)間點(diǎn)生長(zhǎng)抑制率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而在DDP組，細(xì)胞生長(zhǎng)不同時(shí)間點(diǎn)抑制率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。<

6、br>　　2.AnnexinV/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示，分別作用24小時(shí)、48小時(shí)及72小時(shí)，ATRA、DDP、ATRA+DDP組細(xì)胞的凋亡率明顯高于對(duì)照組，ATRA組細(xì)胞的凋亡率高于DDP組;隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，除對(duì)照組外，各組細(xì)胞的凋亡率均增加。
　　3.免疫組化檢測(cè)Bcl-2及P53基因表達(dá)情況，與對(duì)照組相比，ATRA組、DDP組及聯(lián)合組bcl-2表達(dá)降低，密度及深度均減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);與對(duì)照組及

7、DDP組比較，ATRA、ATRA聯(lián)合DDP作用于肺癌A549細(xì)胞后，P53表達(dá)增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);與ATRA組相比，聯(lián)合組P53表達(dá)進(jìn)一步增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。把bcl-2與P53基因表達(dá)結(jié)果進(jìn)行Pearson相關(guān)分析，繪制兩者含量的散點(diǎn)圖，結(jié)果顯示相關(guān)系數(shù)r=-0.438，P＜0.05。提示兩者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.ATRA對(duì)肺癌A549的增殖具有抑制作用，ATRA能促進(jìn)