順鉑聯(lián)合低分子肝素對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞增殖及bcL-2、bax表達(dá)的影響.pdf

1、目的:作為第一代鉑類化療藥物，順鉑為周期非特異性藥，其主要是與DNA鏈內(nèi)及鏈間交聯(lián)，干擾DNA的復(fù)制，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡，而目前的研究卻發(fā)現(xiàn)順鉑的抗腫瘤毒性與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。低分子肝素作為一種重要的抗凝物質(zhì)，除了其抗凝作用以外，近年發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤、抗炎癥、抗病毒等生物學(xué)作用，特別是抗腫瘤作用受到學(xué)者關(guān)注，其抗腫瘤凋亡機(jī)制成為近年來(lái)研究熱點(diǎn)。目前大多實(shí)驗(yàn)僅僅只是對(duì)順鉑或是低分子肝素兩藥各自凋亡的研究，尚未見其聯(lián)合用藥的相關(guān)研究報(bào)道，因此

2、，本基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)旨在觀察順鉑聯(lián)合低分子肝素預(yù)處理人肺腺癌A549細(xì)胞的作用，并對(duì)其可能的增殖抑制、凋亡機(jī)制等進(jìn)行初步探討，從而為臨床上肺癌的化療提供更有效的方案及理論依據(jù)，以提高晚期肺癌患者的生命質(zhì)量。
　　方法:采用HyClone改良型RPMI-1640培養(yǎng)基對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，然后放置于5％CO2、37℃恒溫孵育箱中孵育，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組分為順鉑組(DDP組:濃度為2ug/

3、ml)，低分子肝素組（LMWH組:濃度為:10ug/ml），順鉑聯(lián)合低分子肝素組（DDP+LMWH組:濃度為2ug/ml+10ug/ml），對(duì)照組不加順鉑和低分子肝素。采用MTT實(shí)驗(yàn)方法，分別在48h，72h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組吸光度值，計(jì)算增殖抑制率，比較各組兩兩之間的差異;采用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞凋亡率，比較各組兩兩之間的差異;采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測(cè)量各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞中bcl-2蛋白和b

4、ax蛋白含量，比較各組兩兩之間的差異。
　　結(jié)果:1.增殖抑制率:DDP+LMWH組對(duì)A549細(xì)胞增殖抑制作用強(qiáng)于DDP組和LMWH組單獨(dú)的抑制率(P＜0.05，n=10)，分別與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05，n=10)，且72h抑制作用比48h更明顯;2.凋亡率:DDP+LMWH組誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡作用強(qiáng)于DDP組和LMWH組單獨(dú)的凋亡作用(P＜0.05，n=3)，且分別與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05，n=3);3.b

5、cl-2蛋白:DDP+LMWH組作用下調(diào)了A549細(xì)胞中bcl-2蛋白的表達(dá)，且強(qiáng)于DDP組和LMWH組單獨(dú)的下調(diào)作用（P＜0.05，n=10），與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，n=10);4.bax蛋白:DDP+LMWH組作用上調(diào)了A549細(xì)胞中bax蛋白的表達(dá)，并且強(qiáng)于DDP組和LMWH組單獨(dú)的上調(diào)作用(P＜0.05，n=10)，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，n=10)。
　　結(jié)論:1.順鉑聯(lián)合低分子