8-溴-7-甲氧基白楊素對(duì)肝癌Huh-7細(xì)胞系腫瘤球形成細(xì)胞自我更新的影響.pdf

1、目的：
　　研究新型白楊素合成類似物8-溴-7-甲氧基白楊素(8-bromo-7-methoxychrysin, BrMC)抑制源自人肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC) Huh-7細(xì)胞系細(xì)胞腫瘤球形成細(xì)胞即肝癌干細(xì)胞樣細(xì)胞(liver cancer stem cell like cells, LCSLCs)增殖活性、自我更新能力和下調(diào)β-catenin蛋白表達(dá)作用及其機(jī)制的探討。
　　方法

2、：
　　體外培養(yǎng)人肝癌Huh-7細(xì)胞系細(xì)胞，并用干細(xì)胞條件培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)法富集和擴(kuò)增LCSLCs，采用腫瘤球形成法檢測(cè)不同濃度的BrMC對(duì)LCSLCs自我更新能力的影響。MTT比色法測(cè)定BrMC對(duì)LCSLCs細(xì)胞活性的影響；異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)標(biāo)記CD133抗體流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry, FCM)分析BrMC對(duì)LCSLCs細(xì)胞的干細(xì)胞標(biāo)志物CD133表達(dá)

3、的影響。同時(shí)，蛋白免疫印跡分析BrMC對(duì)LCSLCs細(xì)胞β-catenin蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　采用干細(xì)胞條件培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)7天，在體外培養(yǎng)人肝癌Huh-7細(xì)胞系細(xì)胞中得到呈典型非粘附三維生長(zhǎng)的肝癌球體細(xì)胞即 LCSLCs。MTT比色法測(cè)定結(jié)果表明，不同濃度BrMC處理人肝癌Huh-7細(xì)胞系細(xì)胞和LCSLCs，細(xì)胞活性明顯下降，成劑量依賴性(P＜0.05),與親本Huh-7細(xì)胞系細(xì)胞比較，其抑制LCSLCs細(xì)胞活

4、性作用更強(qiáng)(P＜0.05)。腫瘤球形成法檢測(cè)結(jié)果顯示，在5.0～20.0μM濃度范圍內(nèi)， BrMC以濃度依賴方式減少 LCSLCs的腫瘤球數(shù)目(P＜0.05)。FITC-CD133標(biāo)記FCM分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)BrMC以濃度依賴方式降低LCSLCs的干細(xì)胞標(biāo)志蛋白CD133表達(dá)(P＜0.05)。Western blot法檢測(cè)顯示BrMC以濃度依賴方式降低LCSLCs細(xì)胞β-catenin蛋白表達(dá)(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
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