脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化過程中MocrpRNAi活性變化的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 1.探索SD大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ADMSCs)的分離、培養(yǎng)方法；
　　 2.證明ADMSCs在5-氮雜胞苷(5-Aza)誘導(dǎo)下可分化為心肌細(xì)胞；
　　 3.探討ADMSCs細(xì)胞在向心肌細(xì)胞分化過程中miRNA的變化譜。
　　 方法：
　　 1.SD大鼠ADMscs的分離、培養(yǎng)、鑒定：無菌條件下取SD大鼠腹股溝皮下脂肪組織，采用胰酶加Ⅰ型膠原酶消化法及貼壁法進(jìn)行分離培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)觀察；

2、取第3代細(xì)胞進(jìn)行表面抗原的免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定；
　　 2.ADMSCs的體外誘導(dǎo)及鑒定：對第3代細(xì)胞行5-Aza誘導(dǎo)，觀察細(xì)胞形態(tài)變化，進(jìn)行α-actin及cTnT免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定。
　　 3.測定培養(yǎng)ADMSCs向心肌細(xì)胞分化過程中miRNA的變化譜：細(xì)胞分為三組，第一組為第三代ADMSCs，第二組為同期培養(yǎng)未經(jīng)誘導(dǎo)的ADMSCs，第三組為經(jīng)5-Aza誘導(dǎo)后培養(yǎng)四周的細(xì)胞。應(yīng)用miRNA生物傳感器陣列(miRNA A-S

3、ensor Array)方法分別檢測以上三組細(xì)胞的miRNA譜，比較之間的差異。
　　 結(jié)果：
　　 1.脂肪組織中含有大量長梭形細(xì)胞，成螺旋形生長，免疫化學(xué)鑒定顯示與空白對照相比較細(xì)胞表面分子抗原CD13、CD44、CD105呈陽性反應(yīng)，CD34、CD45、HLA-DR和VⅢ因子均為陰性反應(yīng)。
　　 2.10umol/L的5-Aza誘導(dǎo)24小時后更換含10％胎牛血清的IMDM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，多數(shù)細(xì)胞為長梭形，部

4、分細(xì)胞形態(tài)變?yōu)椴灰?guī)則星狀或桿狀，細(xì)胞體積及胞核變大，部分細(xì)胞聚集成團(tuán)。與空白對照比較28d后多數(shù)細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示α-actin、cTnT呈陽性反應(yīng)。
　　 3.應(yīng)用miRNA生物傳感器陣列(miRNA A-Sensor Array)方法分別檢測三組細(xì)胞123種miRNA活性，第三代ADMSCs中miRNA活性值RIF不小于5的共有35種。發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)后細(xì)胞的所有miRNA活性均有所上升?；钚陨仙顬槊黠@的15種miRNA順序

5、為：1et-7a，1et-7b，1et-7e，1et-7f，1et-7g，miR-125a-5p，miR-142-5p，miR-143，miR-145，miR-21，miR-222，miR-34c-5p，miR-92a。
　　 結(jié)論：
　　 1.出生三天的SD大鼠脂肪組織中含有具有多向分化潛能的間充質(zhì)干細(xì)胞。
　　 2.10umol/L濃度的5-Aza可誘導(dǎo)脂肪干細(xì)胞分化為心肌樣細(xì)胞。
　　 3.miRN