脂肪間充質(zhì)干細胞向心肌樣細胞分化的實驗研究.pdf

1、[目的]
　　 1.比較不同代數(shù)的脂肪間充質(zhì)干細胞(ASCs)表面抗原。
　　 2.在體外誘導(dǎo)ASCs分化為心肌樣細胞。
　　 3.探討Notch通路信號分子Notch1和Jagged1在ASCs分化為心肌樣細胞過程中的作用。
　　 [方法]
　　 采用酶消化、離心和直接貼壁相結(jié)合方法分離培養(yǎng)SD大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞，觀察干細胞增殖、傳代和復(fù)蘇情況，流式細胞儀分析干細胞表面抗原CD29、CD44、

2、CD31、CD45的表達水平，誘導(dǎo)干細胞向成骨、成脂方向分化;根據(jù)酶消化法及差速貼壁法分離純化心肌細胞(CMs)，觀察心肌細胞活性和生長特點;干細胞和心肌細胞混合培養(yǎng)為實驗組，對照組為干細胞單獨培養(yǎng)。用免疫熒光檢測cTnI和connexin43蛋白的表達情況，鑒定干細胞是否分化為心肌樣細胞，免疫細胞化學(xué)、RT-PCR檢測干細胞在增殖與分化為心肌樣細胞過程中Notch信號系統(tǒng)分子Notch1和Jagged1表達量的變化。
　　 [

3、結(jié)果]
　　 1.ASCs呈長梭形、漩渦狀生長，增殖傳代能力強，復(fù)蘇的細胞與未凍存細胞形態(tài)無明顯差異。
　　 2.ASCs鑒定:第3代ASCs結(jié)果如下:CD29表達率為97.78％±2.21％，CD44表達率為43.90％±1.84％，CD31表達率為8.26％±1.47％，CD45表達率為4.23％±1.91％，第3～5代ASCs表面抗原無明顯差異(P＞0.05)，對照組陰性表達;成脂誘導(dǎo)示陽性細胞可見紅色圓形脂滴，成

4、骨誘導(dǎo)示陽性細胞可見玫瑰紅色鈣結(jié)節(jié)，對照組未見上述改變。
　　 3.分化細胞鑒定:轉(zhuǎn)化為心肌樣細胞的ASCs胞漿和胞膜表達cTnI蛋白（呈紅色熒光，陽性細胞）和connexin43蛋白（綠色熒光，陽性細胞），對照組未見以上變化。
　　 4.Notch信號分子檢測:陽性細胞胞質(zhì)有棕黃色和棕褐色顆粒狀物質(zhì)，對照組表達較弱或未見表達。
　　 5.RT-PCR檢測:與對照組比較，ASCs和CMs混合培養(yǎng)組Notch1和J