大麻二酚對HaCaT細(xì)胞體外增殖的抑制作用及其對IL-8、IL-10、IL-10R的影響.pdf

1、目的：檢測大麻二酚(CBD)對人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞株HaCaT細(xì)胞體外增殖的抑制作用及CBD對HaCaT細(xì)胞IL-8、IL-10、IL-10R產(chǎn)生的影響，探討其可能的機(jī)制，為CBD臨床治療炎癥性皮膚病（如銀屑病、扁平苔蘚）提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。
　　方法：以人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞株HaCaT細(xì)胞為模型。采用CCK-8法檢測0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/L、8.0μmol/L CBD作用于H

2、aCaT細(xì)胞24h、48h、72h后對HaCaT細(xì)胞體外增殖的抑制作用;倒置顯微鏡下觀察各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;流式細(xì)胞術(shù)檢測CBD對HaCaT細(xì)胞細(xì)胞周期的影響;半定量-逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)測定不同濃度CBD對HaCaT細(xì)胞IL-8、IL-10 mRNA表達(dá)的影響;Western blot方法測定不同濃度CBD對HaCaT細(xì)胞IL-10和IL-10R產(chǎn)生的影響。
　　結(jié)果：1.CCK-8比色法結(jié)果表明:在相同的

3、作用時間段，不同濃度的CBD均能抑制HaCaT細(xì)胞增殖，與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/L CBD作用HaCaT細(xì)胞48h，對細(xì)胞體外增殖的抑制率達(dá)到最佳，分別為8.49％、13.69％、20.67％、26.33％，CBD對HaCaT細(xì)胞體外增殖的抑制作用與CBD濃度呈顯著劑量依賴關(guān)系(r=0.960，P＜0.05)。2.倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn):

4、對照組的細(xì)胞排列緊密，有光澤，呈鋪路石樣;隨著CBD濃度的增加，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)目逐漸減少，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，逐漸變狹長，且折光度下降。3.流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示:0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/LCBD組G0～G1期比例分別為(47.09±0.11)％、(49.82±0.22)％、(52.79±0.42)％、(56.87±0.10)％，S期比例分別為(48.10±0.05)％、(44.47±0.

5、10)％、(41.32±0.11)％、(35.13±0.15)％，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）;隨著CBD濃度的增加，HaCaT細(xì)胞G0～G1期細(xì)胞比例逐漸增加(r=0.985，P＜0.05)，S期細(xì)胞比例則逐漸減少(r=-0.955，P＜0.05)。統(tǒng)計分析表明HaCaT細(xì)胞周期時相的變化與CBD濃度有劑量依賴關(guān)系。4.RT-PCR檢測結(jié)果表明:不同濃度的CBD對HaCaT細(xì)胞IL-8mRNA的表達(dá)均有抑制作用，對I

6、L-10 mRNA的表達(dá)則有上調(diào)作用。0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/L CBD作用HaCaT細(xì)胞48h后，IL-8/β-actin熒光強(qiáng)度的比值分別為0.677±0.021、0.640±0.010、0.593±0.015、0.553±0.021;IL-10/β-actin熒光強(qiáng)度的比值分別為0.707±0.025、0.770±0.026、0.837±0.006、0.903±0.032，與對照

7、組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。CBD對HaCaT細(xì)胞分泌IL-10 mRNA表達(dá)的上調(diào)作用與藥物濃度呈顯著劑量依賴關(guān)系(r=0.938，(P＜0.05);HaCaT細(xì)胞中IL-8與IL-10 mRNA的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.965，(P＜0.05)。5.Western blot檢測結(jié)果顯示:不同濃度的CBD均可促進(jìn)IL-10和IL-10R蛋白的表達(dá)。0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μm

8、ol/L CBD作用HaCaT細(xì)胞48h后，IL-10/β-actin灰度值比值分別為0.287±0.018、0.373±0.022、0.476±0.055、0.607±0.058;IL-10R/β-actin灰度值比值分別為0.281±0.039、0.421±0.047、0.508±0.018、0.611±0.015，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。且隨著CBD濃度的增加，IL-10(r=0.975，P＜0.05)、I