脊髓水平MiRNA-219通過CaMKⅡγ信號通道調(diào)整慢性炎性疼痛.pdf

1、目的：慢性疼痛仍缺乏有效治療手段，理想治療方法和藥物的開發(fā)依賴于對慢性疼痛發(fā)生機(jī)制的認(rèn)識。脊髓神經(jīng)元可塑性改變被認(rèn)為是慢性疼痛發(fā)生和維持的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，神經(jīng)元可塑性改變很大程度上依賴于神經(jīng)元膜上受體、離子通道和胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的表達(dá)改變，而這些改變又依賴于各自基因的表達(dá)調(diào)控，但慢性疼痛的基因調(diào)控機(jī)制仍不清楚。MiRNA是近年發(fā)現(xiàn)基因表達(dá)調(diào)控的一種方式，它參與調(diào)節(jié)多種生理和病理過程。本項目擬以慢性炎性痛為模型，從整體、細(xì)胞和分子水平闡明脊髓m

2、iRNA-219參與痛行為調(diào)節(jié)機(jī)制，為研發(fā)理想鎮(zhèn)痛藥提供新靶標(biāo)。
　　方法：應(yīng)用RT-PCR技術(shù)分析脊髓miRNA-219表達(dá);應(yīng)用熱輻射法和Von-Frey實驗分別檢測熱痛覺過敏和機(jī)械痛異常;應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測脊髓背角c-Fos蛋白表達(dá);應(yīng)用信息學(xué)預(yù)測法結(jié)合體內(nèi)干擾實驗確定miRNA-219作用靶標(biāo)蛋白;應(yīng)用慢病毒介導(dǎo)基因表達(dá)方法上調(diào)或下調(diào)體內(nèi)miRNA過表達(dá);應(yīng)用Westernblot方法檢測脊髓CaMKⅡγ表達(dá)水平。<

3、br>　　結(jié)果： miRNA-219在慢性炎性痛模型(CFA)中表達(dá)顯著下降，且呈現(xiàn)明顯的時間相關(guān)性。鞘內(nèi)注射miRNA-219類似物(mimics)或過表達(dá)miRNA-219的慢病毒上調(diào)miRNA-219表達(dá)可顯著減輕熱痛覺過敏和機(jī)械痛覺異常，并減少脊髓背角神經(jīng)元敏化標(biāo)志蛋白c-Fos表達(dá);在正常大鼠鞘內(nèi)注射慢病毒下調(diào)miRNA-219表達(dá)則顯著誘發(fā)熱痛覺過敏和機(jī)械痛覺異常，并增加脊髓背角c-Fos表達(dá);細(xì)胞及在體實驗均證明CaMKⅡ