Th1與Th17相互調(diào)節(jié)在衣原體呼吸道感染中發(fā)揮免疫保護作用.pdf

1、目的:用沙眼衣原體小鼠肺炎菌株(Cm)呼吸道感染BALB/c小鼠,建立小鼠衣原體肺炎模型,檢測衣原體肺炎癥中Th1和Th17免疫應答水平。利用體內(nèi)抗體中和技術探討小鼠衣原體肺感染中Th1和Th17應答的作用及IFN-γ和IL-17對Th17與Th1應答的調(diào)節(jié)。
　　 方法:取6-8周BALB/c小鼠,鼻腔吸入40ul含1×103IFU Cm的PBS,建立Cm肺感染模型。通過觀察感染衣原體后小鼠體重變化、死亡率、腫組織衣原體繁殖及

2、肺組織病理學變化等確定感染小鼠的疾病狀態(tài)；在感染后不同天處死小鼠,分離肺組織,利用RT-PCR技術檢測感染小鼠肺組織Th1和Th17相關細胞因子IFN-γ和IL-17及其上游因子IL-12和IL-23mRNA表達:制備小鼠脾細胞懸液,利用細胞內(nèi)細胞因子染色技術檢測IFN-γ-CD4+T細胞與IL-17-CD4+T細胞百分率,確定感染小鼠Th1與Th17免疫應答水平。利用單克隆抗體體內(nèi)中和技術分別中和Cm感染小鼠內(nèi)源性IFN-γ和IL-1

3、7,通過觀察小鼠的疾病狀態(tài)確定IFN-γ和IL-17在Cm感染中的作用。在感染后第7天處死小鼠,利用RT-PCR技術檢測內(nèi)源性IL-17和IFN-γ中和小鼠肺組織IFN-γ和IL-17及其上游因子IL-12和IL-23mRNA的表達；利用細胞內(nèi)細胞因子染色技術檢測IFN-γ-CD4+T細胞與IL-17-CD4+T細胞的擴增,探討小鼠衣原體肺感染中IFN-γ和IL-17對Th17與Th1應答的調(diào)節(jié)。
　　 結果:Cm鼻腔吸入感染小

4、鼠引起典型的衣原體肺炎,以小鼠體重下降、肺組織衣原體繁殖及大量炎癥細胞浸潤為特征。Cm呼吸道感染可誘導小鼠肺組織及脾臟產(chǎn)生高水平的Th1和Th17應答,肺組織IFN-γ和IL-17及其上游因子IL-12和IL-23mRNA表達顯著增高、脾臟IFN-γ-CD4+T細胞及IL-17-CD4+T細胞顯著擴增。內(nèi)源性IFN-γ或IL-17中和衣原體感染小鼠呈現(xiàn)嚴重的疾病狀態(tài),表現(xiàn)為嚴重的體重降低、較長的疾病過程、肺組織較高的衣原體生長及嚴重的肺

5、組織病理損傷；與PBS對照組小鼠相比,IFN-γ與IL-17抗體中和小鼠IL-17及IFN-γ及其上游因子IL-23及IL-12mRNA的表達均明顯下調(diào)；脾臟IL-17-CD4+T細胞與IFN-γ-CD4+T細胞擴增能力也顯著降低。
　　 結論:Cm呼吸道感染小鼠引起典型的衣原體肺炎。衣原體呼吸道感染誘導小鼠產(chǎn)生高水平的Th1和Th17應答。IFN-γ和IL-17通過交互上調(diào)衣原體特異性的Th17與Th1應答在小鼠衣原體肺感染中