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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:探討 LIGHT信號(hào)通路在鸚鵡熱嗜衣原體(Chlamydia psittaci,Cps)呼吸道感染過(guò)程中的作用及機(jī)制。
方法:野生型(Wild type,WT)小鼠和LIGHT基因敲除(Knock out,KO)小鼠各50只,每只小鼠鼻內(nèi)接種4.5×105IFU Cps,每天觀察記錄小鼠的進(jìn)食、活動(dòng)、體重變化及生存情況。在感染前和感染后第4、9、14天分別處死各組8只小鼠,其中4只小鼠的肺組織用于制備肺組織勻漿,體外感染
2、 Hela細(xì)胞,通過(guò)間接免疫熒光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)測(cè)定包涵體形成單位(inclusion forming unit,IFU);另4只小鼠的右肺用于制備支氣管肺泡灌洗液(broncho-alveolar lavage fluid,BALF)并對(duì)其中浸潤(rùn)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),部分左肺經(jīng)多聚甲醛固定,用于制作石蠟切片并進(jìn)行蘇木素-伊紅染色(hematoxylin and eosin St
3、aining,HE),以評(píng)估肺部病理?yè)p害,剩余部分左肺用于提取總RNA,通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄-定量PCR法(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)檢測(cè)IFN-γ、TNF-α、IL-17、IL-4、IL-6和IL-12的mRNA水平。分離小鼠脾臟,制備脾細(xì)胞懸液,流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry,F(xiàn)CM)檢測(cè)脾臟中 CD4+ T細(xì)胞、CD8+
4、 T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞(Regulatory T cell,Treg)的百分率。
結(jié)果:經(jīng)呼吸道感染Cps后,小鼠出現(xiàn)進(jìn)食減少、活動(dòng)下降、體重減輕等癥狀,并出現(xiàn)死亡。與WT小鼠相比,LIGHT KO小鼠上述癥狀出現(xiàn)更嚴(yán)重,并有更高的死亡率。肺組織病理結(jié)果顯示,Cps感染導(dǎo)致肺部出現(xiàn)充血、水腫和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變,LIGHT KO小鼠的肺病理?yè)p害程度顯著重于WT小鼠。與之對(duì)應(yīng),LIGHT KO小鼠BALF中浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞數(shù)
5、量顯著多于WT小鼠。IFA結(jié)果顯示,感染Cps后的第4、9、14天,LIGHT KO小鼠的肺部Cps載量均顯著高于WT小鼠;至感染后第14天,WT小鼠肺部Cps已被清除,而LIGHT KO小鼠肺部仍可檢出Cps。兩組小鼠脾細(xì)胞中CD4+T細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞百分率和比例無(wú)明顯區(qū)別,但LIGHT KO小鼠的Treg細(xì)胞比例顯著高于WT小鼠。兩組小鼠感染 Cps后細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17、IL-4、IL-6及IL-12的
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