針對(duì)HERG鉀通道的早期心臟毒性評(píng)價(jià)的高通量篩選細(xì)胞模型.pdf

1、AdissertationsubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEarlyCardiotoxicityEvaluationbyHighThroughputScreeningofhERGPotassiumChanneloncellByChongLiu一Supervisor：QiZhang&YangLiClinicalPharmacology一，SchoolofPharmacyM

2、ay2012摘要摘要藥物研發(fā)失敗的重要原因之一是由于其心臟毒性。很多化合物由于非特異性的抑制了心肌細(xì)胞中的址’RG(humanetheragogorelatedgene)鉀離子通道而導(dǎo)致心率失常，嚴(yán)重時(shí)則導(dǎo)致病人猝死。有些藥物在研發(fā)后期或者已經(jīng)上市之后，才發(fā)現(xiàn)其抑制bERG鉀通道而導(dǎo)致心臟毒性，最終不得不撤出市場(chǎng)。因此建立針對(duì)bERG鉀通道的心臟毒性評(píng)價(jià)體系在國(guó)際藥物研發(fā)領(lǐng)域是必須的步驟，從而實(shí)現(xiàn)“早期發(fā)現(xiàn)早期淘汰“，為新藥研發(fā)節(jié)省時(shí)間

3、和費(fèi)用。檢測(cè)藥物的bERG心臟毒性，目前最常用方法主要為傳統(tǒng)的膜片鉗技術(shù)。由于膜片鉗技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)人員要求相對(duì)比較高，且通量低，僅適于候選藥物的確定或新藥申報(bào)階段，及在檢測(cè)少量化合物時(shí)方可用使用。因此發(fā)展針對(duì)hERG鉀通道的高通量篩選模型是藥物研發(fā)的必然趨勢(shì)。而基于熒光的高通量篩選技術(shù)利用bERG通道對(duì)金屬鉈離子的通透性，又采用對(duì)鉈離子敏感的熒光染料，配備全自動(dòng)化熒光檢測(cè)系統(tǒng)，可實(shí)現(xiàn)大批量化合物的篩選來檢測(cè)藥物對(duì)bERG通道的作用。此方法通

4、量高、測(cè)試周期短，適于結(jié)構(gòu)多樣的化合物庫(kù)的檢測(cè)及先導(dǎo)化合物發(fā)現(xiàn)階段大批量化合物bERG心臟毒性的早期初篩。目前在國(guó)內(nèi)還沒有成熟的針對(duì)bERG的高通量篩選模型，為了檢驗(yàn)我們建立的hERG鉀通道的高通量篩選方法，我們研用經(jīng)典的全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)進(jìn)行了對(duì)照。通過全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄在HEK(humanembryonickidney)293細(xì)胞上瞬時(shí)表達(dá)的hERG鉀通道的電流和動(dòng)力學(xué)曲線(激活、失活、復(fù)活和去活化)來研究幾種不同化合物對(duì)bERG電