針對HERG鉀通道的早期心臟毒性評價的高通量篩選細(xì)胞模型.pdf

1、AdissertationsubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEarlyCardiotoxicityEvaluationbyHighThroughputScreeningofhERGPotassiumChanneloncellByChongLiu一Supervisor：QiZhang&YangLiClinicalPharmacology一，SchoolofPharmacyM

2、ay2012摘要摘要藥物研發(fā)失敗的重要原因之一是由于其心臟毒性。很多化合物由于非特異性的抑制了心肌細(xì)胞中的址’RG(humanetheragogorelatedgene)鉀離子通道而導(dǎo)致心率失常，嚴(yán)重時則導(dǎo)致病人猝死。有些藥物在研發(fā)后期或者已經(jīng)上市之后，才發(fā)現(xiàn)其抑制bERG鉀通道而導(dǎo)致心臟毒性，最終不得不撤出市場。因此建立針對bERG鉀通道的心臟毒性評價體系在國際藥物研發(fā)領(lǐng)域是必須的步驟，從而實現(xiàn)“早期發(fā)現(xiàn)早期淘汰“，為新藥研發(fā)節(jié)省時間

3、和費用。檢測藥物的bERG心臟毒性，目前最常用方法主要為傳統(tǒng)的膜片鉗技術(shù)。由于膜片鉗技術(shù)對實驗人員要求相對比較高，且通量低，僅適于候選藥物的確定或新藥申報階段，及在檢測少量化合物時方可用使用。因此發(fā)展針對hERG鉀通道的高通量篩選模型是藥物研發(fā)的必然趨勢。而基于熒光的高通量篩選技術(shù)利用bERG通道對金屬鉈離子的通透性，又采用對鉈離子敏感的熒光染料，配備全自動化熒光檢測系統(tǒng)，可實現(xiàn)大批量化合物的篩選來檢測藥物對bERG通道的作用。此方法通

4、量高、測試周期短，適于結(jié)構(gòu)多樣的化合物庫的檢測及先導(dǎo)化合物發(fā)現(xiàn)階段大批量化合物bERG心臟毒性的早期初篩。目前在國內(nèi)還沒有成熟的針對bERG的高通量篩選模型，為了檢驗我們建立的hERG鉀通道的高通量篩選方法，我們研用經(jīng)典的全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)進(jìn)行了對照。通過全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄在HEK(humanembryonickidney)293細(xì)胞上瞬時表達(dá)的hERG鉀通道的電流和動力學(xué)曲線(激活、失活、復(fù)活和去活化)來研究幾種不同化合物對bERG電