苯丙氨酸乙酯修飾海藻酸鈉納米粒的制備及應(yīng)用.pdf

1、本論文以苯丙氨酸乙酯為疏水基團(tuán),制備了疏水修飾的海藻酸鈉-苯丙氨酸乙酯(SA-PE,SP)耦合物,研究了這種兩親性分子在水溶液中的自組裝行為:以維生素B2(VB2)為模式營養(yǎng)物制備了載藥的海藻酸鈉納米粒(VB2-SP),研究了其在體外的藥物緩釋效果;以人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2為模型細(xì)胞,考察了納米粒的細(xì)胞毒性,并探討了細(xì)胞對納米粒的攝取機(jī)制以及影響因素。
　　 利用EDC和NHS作為交聯(lián)劑,通過酰胺鍵共價(jià)連接苯丙氨酸乙酯(L-P

2、henylalanine ethyl ester,PE)到海藻酸鈉(sodium alginate,SA)上SP化學(xué)耦合物,并改變苯丙氨酸乙酯與海藻酸鈉的反應(yīng)摩爾比制成三種不同取代度的樣品(SP1、SP2、SP3)。利用核磁共振和紅外光譜檢測證明了產(chǎn)物的結(jié)構(gòu);利用元素分析儀測定了產(chǎn)物的取代度,每100個(gè)單糖分子約含有3.5-4.7個(gè)PE分子;通過超聲法制備SP納米粒懸液,利用動態(tài)激光散射、透射電子顯微鏡和熒光光譜技術(shù)對納米粒的理化性質(zhì)進(jìn)

3、行了測定,納米粒的粒徑隨取代度增加而減小,粒徑分布為226.7-425.3nm,納米粒近似球形,形態(tài)完整;SP納米粒的臨界聚集濃度(CAC)隨著取代度的升高而降低,SP1,SP2和SP3的CAC值分別是:0.20mg/ml、0.12mg/ml、0.10mg/ml。
　　 以VB2為模式營養(yǎng)物,利用超聲法將VB2包被到納米粒中,制備載藥納米粒(VB2一SP)。隨著加藥量的提高,SP納米粒的包封率降低,載藥量提高,SP1納米粒的最大

4、載藥量為12.76±1.22％;隨著取代度的升高,包封率和載藥量都有提高。VB2-SP的緩釋通過透析的方法進(jìn)行研究,48h內(nèi)SP納米粒對VB2具有良好的緩釋效果;VB2的釋放量受取代度和pH的影響,取代度越高,緩釋效果越好;相對于pH7.4,VB2-SP在pH2.0條件下釋放更為緩慢;SP納米粒適合作為營養(yǎng)物質(zhì)VB2的載體。
　　 利用MTT法測定不同取代度的空白SP納米粒細(xì)胞毒性,并利用熒光酶標(biāo)儀與激光共聚焦掃描顯微鏡(CLS

5、M)研究Caco-2細(xì)胞對于熒光標(biāo)記SP納米粒的攝取情況。結(jié)果表明,除了1mg/ml的SP3納米粒,其他SP納米粒對于Caco-2細(xì)胞無顯著毒性,24h后存活率仍在95％以上;細(xì)胞對納米粒的攝取率受取代度、納米粒濃度、孵育時(shí)間和溫度的影響,在高取代度低濃度較長孵育時(shí)間條件下,細(xì)胞對納米粒具有高的攝取率;4h內(nèi)大約有60％的SP納米粒被Caco-2細(xì)胞攝取;4℃下細(xì)胞對納米粒的攝取受到抑制;激光共聚焦掃描顯微鏡結(jié)果顯示SP納米粒能被Cac