TPRN基因突變檢測分析及其質粒表達載體的構建.pdf

1、耳聾是造成人類殘疾最常見的原因，我國現有聽力言語殘疾者達2780萬人，居各類殘疾的首位。目前全世界每1000個新生兒中就有一個先天性的聾兒，我國每年約有3萬聾兒出生，其中60％為遺傳性聾。在遺傳性聾中，非綜合征性聾約占70％，綜合征性聾占30％。最常見的類型為常染色體隱性遺傳性非綜合征性聾，占非綜合征性聾的比例約77％。目前已發(fā)現常染色體隱性遺傳性非綜合征性聾位點73個，相關基因40個。
　　TPRN基因是2010年發(fā)現的一個主要

2、表達在毛細胞靜纖毛Taper區(qū)域的常染色體隱性遺傳性耳聾79型(DFNB79)的致病基因，其表達產物為Taperin蛋白。
　　為了解TPRN基因突變在中國人非綜合征性聾人群中的分布情況和研究Taperin蛋白在聽覺產生中的作用。本實驗一方面采用耳聾基因芯片檢測法和DNA直接測序法對耳聾患者進行TPRN基因突變的檢測分析;另一方面構建TPRN shRNA質粒表達載體為下一步的TPRN基因體外抑制實驗做準備。
　　一.TPRN

3、基因在中國非綜合征型耳聾患者中的檢測
　　目的:研究TPRN基因在中國人非綜合征性聾患者中的突變發(fā)生的概率、突變形式。
　　方法:采用耳聾基因芯片對81名非綜合征性聾患者進行耳聾基因檢測，排除了常見的4個致病基因的9個位點后，采用DNA直接測序法對這81例耳聾患者和52例健康對照成員進行TPRN基因的檢測。
　　結果:81名耳聾患者中未發(fā)現已報道的TPRN基因突變;2名患者在1號外顯子處發(fā)現攜帶有相同的TPRN基因雜合

4、子突變559G＞T，導致編碼的氨基酸由丙氨酸變?yōu)榻z氨酸(A187S)，對照組中未發(fā)現相同突變。另外在患者和正常人中發(fā)現1號外顯子處2個同義突變157C＞T和318C＞T。經氨基酸同源性分析得出A187S位于Taperin蛋白的高度保守區(qū)域內，而且在對照組未發(fā)現該突變，此突變可能與耳聾有關。
　　結論目前發(fā)現TPRN基因突變在中國人非綜合征型耳聾患者中整體發(fā)生頻率較低，其功能有待進一步研究。
　　二.TPRN siRNA質粒表