供體脾細(xì)胞聯(lián)合抗CD154輸注誘導(dǎo)小鼠肺移植慢性排斥反應(yīng)免疫耐受基因表達(dá)譜研究.pdf

1、本研究分為三部分：
　　 第一部分：小鼠氣道異位移植后肺移植慢性排斥反應(yīng)模型的建立
　　 背景和目的：通過建立小鼠的氣道異位移植模型來模擬肺移植慢性排斥反應(yīng)，為閉塞性細(xì)支氣管炎研究提供一種新的模型選擇。
　　 方法：同種異體移植組(Allograft組)以BALB/c小鼠為供者，C57BL/6小鼠為受者，同系移植組(Isograft組)供受者均為BALB/c小鼠。取供體小鼠的氣管、左右主支氣管連續(xù)氣道作為供體，異

2、位移植到受體小鼠背部皮下。分別于移植后第5、15、25天時(shí)，各取3只，將移植氣管段取出作病理組織學(xué)分析。
　　 結(jié)果：18例模型動(dòng)物全部存活，無感染。病理切片示Allograft組小鼠移植氣管管腔閉塞，慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)廣泛，氣管上皮完全脫落，纖維組織增生明顯，呈現(xiàn)閉塞性細(xì)支氣管炎表現(xiàn)；Isograft組小鼠移植氣管的組織形態(tài)未見明顯異常。
　　 結(jié)論：小鼠異位氣管移植的動(dòng)物模型簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、穩(wěn)定性強(qiáng)、重復(fù)性好，能準(zhǔn)確復(fù)制肺移

3、植后閉塞性細(xì)支氣管炎的病理過程。
　　 第二部分：小鼠肺移植慢性排斥反應(yīng)模型移植氣道中基因差異表達(dá)譜研究
　　 背景和目的:閉塞性細(xì)支氣管炎（OB）是限制肺移植患者長(zhǎng)期生存的主要因素，但無法被現(xiàn)有免疫抑制劑方案所逆轉(zhuǎn)。其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。應(yīng)用基因芯片技術(shù)分析肺移植后OB形成前期移植氣道的基因表達(dá)譜，為預(yù)防性干預(yù)提供理論依據(jù)。
　　 方法:首先建立小鼠異位氣道移植OB模型，BALB/c小鼠氣道異位移植到C57BL/

4、6小鼠（同種異體移植組）或BALB/c小鼠（同系移植組）背部皮下。分別在術(shù)后5、15和25d 取出移植氣道檢測(cè)形態(tài)學(xué)改變，并利用CSME-80 鼠cDNA 芯片檢測(cè)15d 兩組移植物內(nèi)基因表達(dá)差異，分析具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的基因表達(dá)和OB發(fā)病的關(guān)系。選擇部分顯著差異表達(dá)基因行實(shí)時(shí)熒光定量或半定量RT-PCR 鑒定。
　　 結(jié)果:OB 前期存在大量基因表達(dá)變化，在兩個(gè)通道均有效的雜交信號(hào)中，上調(diào)表達(dá)的有422個(gè)，OB發(fā)生主要涉與UPP、

5、TGFβ等與細(xì)胞周期、細(xì)胞生存相關(guān)的基因類型。
　　 結(jié)論:肺移植后OB 前期是多因素參與的不平衡過程。大量基因與細(xì)胞生存相關(guān)，免疫性因素相對(duì)較少，提示可能的肺移植OB 治療策略的轉(zhuǎn)變，我們推測(cè)：肺移植BOS的治療策略應(yīng)該由加強(qiáng)免疫抑制和抗炎治療為主轉(zhuǎn)變?yōu)橐种萍±w維母細(xì)胞分化和組織重構(gòu)為主，其中的主要效應(yīng)細(xì)胞不再是淋巴細(xì)胞或巨噬細(xì)胞，而應(yīng)是肌纖維母細(xì)胞。
　　 第三部分：供體脾細(xì)胞聯(lián)合抗CD154輸注誘導(dǎo)肺移植慢性排斥反

6、應(yīng)免疫耐受的基因表達(dá)譜研究
　　 背景和目的:誘導(dǎo)特異性免疫耐受是解決臨床實(shí)體器官移植排斥反應(yīng)等問題的理想措施，但其確切機(jī)制并不明確。我們應(yīng)用基因芯片技術(shù)分析比較DST/anti-CD154方案誘導(dǎo)肺移植后閉塞性細(xì)支氣管炎免疫耐受和慢性排斥反應(yīng)形成前期移植氣道的基因表達(dá)譜，進(jìn)一步探討誘導(dǎo)免疫耐受的分子機(jī)制。
　　 方法:首先建立小鼠異位氣道移植OB 耐受模型：C57BL/6小鼠接受異位氣道移植前7天，取BALB/c小鼠脾

7、臟制備脾細(xì)胞懸液，將濃度0.5ml 2×107 脾細(xì)胞懸液經(jīng)尾靜脈緩慢注入。C57BL/6小鼠行抗小鼠CD154 腹腔注射：劑量0.5 mg/鼠，時(shí)間：分別于移植-7,-4,0,4天分次注入。對(duì)照組：同種異體移植組（BALB/c→C57BL/6）。術(shù)后15d，25d，100d 取出移植氣道檢測(cè)形態(tài)學(xué)改變，并利用CSME-80 鼠cDNA 芯片檢測(cè)15d時(shí)兩組移植物內(nèi)基因表達(dá)差異，分析具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的基因表達(dá)與排斥和耐受之間的關(guān)系。選擇部

8、分顯著差異表達(dá)基因行實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR 鑒定。
　　 結(jié)果:DST/anti-CD154方案免疫耐受組OB前期存在顯著性表達(dá)差異（上下2倍變化）的基因有930個(gè)，其中與A組混合樣品相比在T組混合樣品中上調(diào)表達(dá)的基因有470個(gè)，下調(diào)表達(dá)的基因有460個(gè)。在兩個(gè)通道均為有效的雜交信號(hào)中，主要涉及到與細(xì)胞生存相關(guān)的各類基因，如細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、蛋白合成及分解等相關(guān)基因，以及免疫相關(guān)基因。通過生物信息挖掘得到Rap1信號(hào)通路

9、、與CD40/CD40L相關(guān)及其它T細(xì)胞表面分子相關(guān)基因、與細(xì)胞周期、細(xì)胞生長(zhǎng)等促進(jìn)纖維增殖的部分基因明顯下調(diào)表達(dá)。部分促炎因子同同種異體移植組一樣上調(diào)表達(dá)。
　　 結(jié)論:Rap1信號(hào)通路、與CD40/CD40L 相關(guān)及其它T細(xì)胞表面分子相關(guān)基因、與細(xì)胞周期、細(xì)胞生長(zhǎng)等促進(jìn)纖維增殖下調(diào)表達(dá)的部分基因等可能與肺移植慢性排斥反應(yīng)耐受密切相關(guān)。進(jìn)一步闡明，肺移植OB形成過程中促纖維增殖相關(guān)基因的核心作用以及肺移植OB的治療策略轉(zhuǎn)變中抑