2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:宮頸癌是婦科常見腫瘤中之一,全球每年約有30萬婦女死于此病,死亡率居世界首位。目前,在傳統(tǒng)的三大療法基礎(chǔ)上,宮頸癌的輔助免疫治療已成為近年來的研究熱點。腫瘤細胞通過分泌免疫抑制物質(zhì)抑制免疫功能從而逃避免疫監(jiān)視,是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機制之一。因此,研究下調(diào)腫瘤免疫抑制物質(zhì)分泌,尋找能夠逆轉(zhuǎn)腫瘤免疫抑制的有效藥物,是開發(fā)抗瘤藥物、明確其抗瘤免疫機理和指導(dǎo)臨床合理應(yīng)用的重要方面。中藥制劑青蒿琥酯ART具有一定的抗瘤作用,以往研究主要集中

2、在上調(diào)機體免疫功能指標、誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡或分化、影響腫瘤組織血管生成以及對腫瘤細胞生長的抑制和細胞毒方面,而對其影響腫瘤細胞免疫抑制及相關(guān)物質(zhì)的分泌,從免疫抑制角度揭示其抗腫瘤機理的系統(tǒng)研究,國內(nèi)外尚少見報道。有研究發(fā)現(xiàn),宮頸癌細胞培養(yǎng)上清具有免疫抑制作用,是其分泌免疫抑制物質(zhì)所致,報道較多的是轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)β1、白介素(IL)10及前列腺素(PG)E2等,而對其分泌外來體(Exosomes)研究尚無報道。本實驗通過檢測ART對

3、Hela細胞免疫抑制物質(zhì)的影響,旨在揭示ART抗瘤新機制,為進一步開發(fā)具有我國特色和自主知識產(chǎn)權(quán)的抗癌中藥制劑奠定實驗基礎(chǔ)和提供理論依據(jù)。
   方法:確定Hela細胞最佳接種濃度及培養(yǎng)時間后,MTT法篩選對Hela細胞無直接毒性的最高ART濃度。制備經(jīng)ART作用48h后的培養(yǎng)上清(ART-S),洗滌去除ART,收集連續(xù)兩次以新鮮培液進行48h再培養(yǎng)的Hela細胞上清(分別稱為ART-S1、ART-S2),以不經(jīng)ART作用的相應(yīng)

4、同步培養(yǎng)的Hela細胞培養(yǎng)上清作對照(分別稱為Control-S、Control-S1、Control-S2)。定量ELISA法測定各上清中TGF-β1、IL-10的含量,紫外分光光度法測定PGE2的A278值;梯度離心法提取上清中的Exosomes,掃描電鏡下觀察其大小形態(tài),紫外分光BCA法檢測蛋白定量的A280;統(tǒng)計分析ART下調(diào)Hela細胞免疫抑制靶分子分泌的種類和程度。
   結(jié)果:1.經(jīng)MTT法確定實驗用Hela細胞接

5、種濃度為2×105/mL,培養(yǎng)時間為48h;2.經(jīng)MTT法確定實驗用對Hela細胞無直接毒性作用ART最高濃度為3.13mg/L;3.未經(jīng)ART作用的Hela細胞可穩(wěn)定分泌所測的4種免疫抑制物質(zhì),以TGF-β1含量最高,可達(989.226±34.836)ng/mL,IL-10的含量為(3.391±0.164)pg/mL,PGE2的含量為(1.318±0.076)pg/mL,Exosomes的OD280值為(0.178±0.027)。經(jīng)

6、ART作用后的Hela細胞,ART-S與Control-S相比,TGF-β1、IL-10、PGE2的含量明顯降低,分別為(2.859±0.520)ng/mL(P<0.001,僅為Control-S含量的0.29%)、(3.010±0.217)pg/mL(P<0.05,為Control-S含量的88.76%)、(1.147±0.931)pg/mL(P<0.05,為Control-S的58.43%);Exosomes含量檢測值無顯著變化(0

7、.143±0.029,P>0.05)。其第一次48h再培養(yǎng)上清(ART-S1)與ART-S相比,TGF-β1、PGE2、Exosomes顯著降低,分別為(0.009±0.001)ng/ml(P<0.001,僅為Control-S1含量的0.00008%)、(1.129±0.916)pg/mL(P<0.05,為Control-S1的52.67%)、0.063±0.142(P<0.05,僅為Control-S的35.4%);IL-10的含量

8、顯著回升(3.121±0.137)pg/mL(P<0.05)。其第二次48h再培養(yǎng)上清(ART-S2)與ART-S1相比,TGF-β1含量顯著回升(0.576±0.032)ng/mL(P<0.001),為Control-S2含量的0.06%;IL-10含量及PGE2含量無顯著變化,分別為(3.207±0.082)pg/mL(P>0.05)、(1.205±0.931)pg/mL(P>0.05);Exosomes的含量與ART-S1相比明顯

9、回升(0.135±0.017,P<0.05),Exosomes蛋白定量顯示第二次48h再培養(yǎng)上清(ART-S2)但與Control-S2相比降低為Control-S2的75.84%。掃描電鏡觀察ART作用前后Hela細胞分泌Exosomes的大小、形態(tài)無明顯差別。
   結(jié)論:
   1.Hela細胞可穩(wěn)定分泌所測4種免疫抑制物質(zhì)。
   2.ART可下調(diào)Hela細胞分泌免疫抑制物質(zhì)TGF-β1、IL-10、PG

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