阿維A對(duì)系統(tǒng)性硬皮病患者皮膚成纖維細(xì)胞功能影響的研究.pdf

1、系統(tǒng)性硬皮病(SSc)是以過(guò)量膠原在皮膚、肺、消化道等內(nèi)臟器官沉積為特征的結(jié)締組織疾病，引起皮膚和內(nèi)臟器官纖維化。近年來(lái)臨床研究表明，阿維A治療SSc具有較好療效，但其作用機(jī)制尚未完全清楚。本課題重點(diǎn)研究了第二代單芳香維A酸一阿維A對(duì)SSc患者皮膚成纖維細(xì)胞(Fb)增殖、膠原合成、Ⅰ型前膠原基因轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞因子TGF-β1分泌的影響，從細(xì)胞和分子水平探討阿維A可能的作用機(jī)制。 第一章阿維A對(duì)SScFb增殖的影響 目的：觀察

2、阿維A對(duì)SScFb形態(tài)及增殖的影響。方法：1.建立SSc患者Fb原代培養(yǎng)細(xì)胞三株。2.倒置顯微鏡觀察10-8～10-5mol/L阿維A作用48h后對(duì)SScFb形態(tài)的影響。3.MTT法分析對(duì)SScFb增殖的影響。結(jié)果：1.實(shí)驗(yàn)所用濃度的阿維A對(duì)SScFb形態(tài)無(wú)明顯影響。2.10-7～10-5mol/L阿維A可顯著抑制SScFb增殖(P＜0.05)，顯示濃度依賴性特征。結(jié)論：1.實(shí)驗(yàn)所用不同濃度的阿維A對(duì)SScFb形態(tài)無(wú)明顯影響。2.阿維A

3、可顯著抑制SScFb增殖。 第二章阿維A對(duì)SScFb膠原合成及Ⅰ型前膠原基因表達(dá)的影響 目的：研究阿維A對(duì)SScFb膠原蛋白合成及Ⅰ型前膠原基因表達(dá)的影響。方法：1.培養(yǎng)的SScFb加入10-8～10-5mol/L阿維A48h后，酶標(biāo)儀測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中羥脯氨酸含量，折算成膠原蛋白含量。2.培養(yǎng)的SScFb加入上述各濃度的阿維A24h后，用BiospinRNASimplyP試劑盒提取細(xì)胞總RNA，RT-PCR方法測(cè)定Ⅰ

4、型前膠原mRNA的表達(dá)。結(jié)果：1.阿維A能抑制SScFb膠原合成，呈濃度依賴性關(guān)系。10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L阿維A均可顯著抑制膠原合成(P＜0.05)。2.10-5、10-6mol/L阿維A可使SScFbⅠ型前膠原mRNA表達(dá)明顯減少(P＜0.05)。結(jié)論：阿維A可通過(guò)抑制SScFbⅠ型前膠原基因表達(dá)減少膠原合成。 第三章阿維A對(duì)SScFb分泌TGF-β1的影響 目的：研究阿維A對(duì)SSc

5、Fb分泌細(xì)胞因子TGF-β1的影響。方法：培養(yǎng)的SScFb加入10-8～10-5mol/L阿維A48h后，ELISA法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TGF-β1含量。結(jié)果：阿維A呈濃度依賴性抑制TGF-β1的分泌，10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L阿維A可顯著減少SScFb分泌TGF-β1(P＜0.01)。結(jié)論：TGF-β1為促進(jìn)膠原合成的主要細(xì)胞因子，阿維A可通過(guò)抑制SScFb自分泌TGF-β1這一間接途徑抑制其膠原蛋白