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文檔簡介
1、目的:探討高遷移率族蛋白-1(HMGB1)體外對健康人與系統(tǒng)性硬化癥(SSc)患者皮膚成纖維細胞活化及Ⅰ型膠原(ColⅠ)、纖連蛋白(Fn)表達的影響。
方法:采用原代組織塊培養(yǎng)法,培養(yǎng)健康人與SSc患者皮膚成纖維細胞,形態(tài)學及波形蛋白免疫細胞化學法鑒定,選取第4-6代細胞進行實驗。予以不同終濃度的HMGB1處理皮膚成纖維細胞24、48、72h,采用MTT法觀察皮膚成纖維細胞的增殖情況;予以終濃度為0.5μ g/ml的HMGB
2、1處理皮膚成纖維細胞48h,0μ g/ml的HMGB1為對照組,Western-Blot法檢測α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)蛋白的表達;Real-Time PCR法檢測ColⅠ及Fn的mRNA表達。
結(jié)果:1.兩組細胞形態(tài)相似,波形蛋白免疫細胞化學法陽性鑒定為成纖維細胞;2.不同終濃度的HMGB1刺激成纖維細胞24、48、72h后,MTT結(jié)果提示HMGB1終濃度為0.5μ g/ml時,輕度抑制健康人皮膚成纖維細胞增殖,而對SS
3、c患者組成纖維細胞則無影響;3.Western-Blot結(jié)果提示HMGB1刺激健康人與SSc患者皮膚成纖維細胞后α-SMA蛋白的表達均較對照組增加(p<0.05),SSc患者α-SMA蛋白表達量高于健康人(p<0.01);4.Real-Time PCR結(jié)果提示HMGB1刺激后SSc患者皮膚成纖維細胞ColⅠ及Fn mRNA的表達較對照組增加(p<0.05)。
結(jié)論:1.HMGB1可以誘導健康人與SSc患者皮膚成纖維細胞向肌成纖
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