神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中傳入信號和信號傳導(dǎo)模式的研究.pdf

1、神經(jīng)免疫學(xué)是二十世紀(jì)末期生命科學(xué)領(lǐng)域發(fā)展最為迅速的學(xué)科之一，神經(jīng)免疫學(xué)科的基礎(chǔ)理論“神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)”學(xué)說已經(jīng)得到學(xué)術(shù)界的認(rèn)同。在“神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)”研究的基礎(chǔ)上，相關(guān)的實驗證明了神經(jīng)系統(tǒng)與免疫系統(tǒng)間存在功能調(diào)節(jié)作用。在神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)信號傳導(dǎo)的解剖學(xué)構(gòu)筑的研究中，調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的功能相關(guān)的傳入信號和信號傳入通路構(gòu)成是領(lǐng)域研究爭論的焦點之一。 本論文在課題組前期不同免疫狀態(tài)大鼠神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)功能相關(guān)腦區(qū)的定位研究工作

2、的基礎(chǔ)上，應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的表面加強(qiáng)激光解析電離-飛行時間-質(zhì)譜技術(shù)(SELDI-TOF-MS)和基質(zhì)輔助激光解析電離-飛行時間-質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOF-MS)及雙向電泳(2-DE)分離技術(shù)等方法對不同免疫狀態(tài)大鼠的外周血清和腦脊液組份進(jìn)行比對分析，探索參與神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)的上傳信號及傳入通路構(gòu)成模式，為進(jìn)一步闡明神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的解剖學(xué)構(gòu)筑提供實驗依據(jù)。 SELDI分析結(jié)果顯示，免疫組動物外周血中觀察到221個有顯著性差

3、異的信號峰，其中173個為表達(dá)量高于對照組的正向表達(dá)峰。實驗各組大鼠腦脊液的分析結(jié)果未見有統(tǒng)計學(xué)意義的特異性差異峰表達(dá)；在實驗組血清中檢測到的特異性差異峰也未在腦脊液中觀察到相對應(yīng)的同步變化。在76個最高峰值為免疫2天的免疫功能相關(guān)性差異表達(dá)的免疫大鼠血清的信號峰中，根據(jù)差異信號峰的分子量、pI值和來源細(xì)胞在已知的神經(jīng)介質(zhì)、神經(jīng)肽、激素和細(xì)胞因子等信號物質(zhì)中進(jìn)行分析篩選，推測可能成為神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)相關(guān)的傳入信號物質(zhì)。經(jīng)2-DE分離和MEL

4、DI-TOF-MS進(jìn)一步分析和鑒定免疫大鼠血清中18KD特異組份，分析報告了18種來源的19個相關(guān)肽段序列，共247氨基酸，但相關(guān)結(jié)果不能滿足任何已知物質(zhì)的氨基酸序列的排序。 我們的實驗結(jié)果證明： 1)本論文采用SELDI技術(shù)對不同免疫狀態(tài)組大鼠和正常對照組大鼠的血清進(jìn)行對比分析的結(jié)果顯示實驗組表達(dá)了221個與免疫功能相關(guān)的差異信號峰；差異信號表達(dá)峰值的分布在免疫2天的有76個，免疫4天有1個，免疫6天有96個；差異峰值

5、統(tǒng)計學(xué)分析具有極顯著性差異，某些差異峰的特異性甚至表現(xiàn)為“全或無”的關(guān)系。這些實驗結(jié)果支持了神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)傳入信號模式研究中兩個重要的代表性假說--“血行傳導(dǎo)通路”和“神經(jīng)傳導(dǎo)通路”假說在神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)傳入信號通路領(lǐng)域研究中達(dá)成的共識，即免疫活性細(xì)胞釋放功能活動相關(guān)信號物質(zhì)到體液(血液)中，進(jìn)而啟動神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)功能。 2)對不同實驗組大鼠的腦脊液組份對比分析的結(jié)果顯示，腦脊液中并不存在與免疫功能變化相關(guān)的神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)功能的傳

6、入信號物質(zhì)，血液中免疫功能相關(guān)的信號物質(zhì)的變化沒有在腦脊液中平行反映。神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)功能相關(guān)信號傳入模式不是“血液-腦脊液-接觸腦脊液的神經(jīng)元系統(tǒng)-中樞腦區(qū)”的血行傳導(dǎo)方式。本論文神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)信號傳導(dǎo)模式研究結(jié)果不支持“血行傳導(dǎo)通路”假說。 3)根據(jù)最高峰值在免疫2天的免疫功能相關(guān)的差異信號峰的分子量、PI值和來源細(xì)胞，在已知的神經(jīng)介質(zhì)、神經(jīng)肽、激素和細(xì)胞因子等信號物質(zhì)中進(jìn)行比對篩選，推測細(xì)胞因子IL-8、IL-15和IL-1

7、8等三個組份可能成為免疫系統(tǒng)釋放的跨系統(tǒng)傳遞的神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)功能相關(guān)的傳入信號物質(zhì)。 4)本論文應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)方法2-DE-MALDI-TOF-MS技術(shù)分析免疫大鼠血清中IL-1分子在神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)傳入通路中的地位和作用，發(fā)現(xiàn)免疫活性細(xì)胞釋放到血液中的IL-1不可能成為免疫系統(tǒng)釋放的跨系統(tǒng)傳遞的信號物質(zhì)，參與神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)功能，否定了“血行傳導(dǎo)通路”和“神經(jīng)傳導(dǎo)通路”假說在神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)傳入信號通路領(lǐng)域研究中關(guān)