幾種家禽血清免疫復(fù)合物的初步研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)健康家鴨、家雞、烏雞和鴿子這四種家禽的血清免疫復(fù)合物進(jìn)行研究。采用PEG沉淀法提取家禽血清中的免疫復(fù)合物，利用SDS-PAGE分析，比較不同PEG沉淀次數(shù)的血清沉淀樣品，從而得到真正不溶于該濃度血清的免疫復(fù)合物，實(shí)驗(yàn)證明經(jīng)過一次PEG沉淀后就能較好的得到家禽血清中的免疫復(fù)合物。在檢測(cè)家禽血清免疫復(fù)合物含量的實(shí)驗(yàn)中，將所得到的免疫復(fù)合物沉淀溶解于0.01mol/L的NaOH中，利用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)450nm下測(cè)定其吸光度。根據(jù)

2、人血清IgG標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程換算出家禽血清免疫復(fù)合物的相對(duì)含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明四種家禽在2％PEG和3.5％PEG兩種條件下，其含量均為家鴨＞家雞＞烏雞＞鴿子。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，在同一PEG濃度處理下，不同家禽血清免疫復(fù)合物中的含量均有顯著差異。而在不同PEG濃度處理下，同一家禽血清免疫復(fù)合物含量也均有顯著差異，均為在3.5％PEG處理組顯著的大于2％PEG處理組的。 采用SDS-PAGE分析家禽血清免疫復(fù)合物中的抗體成分，在電泳

3、圖譜中，對(duì)照蛋白Marker，可以看出家雞和烏雞明顯存在IgG和IgM的重鏈和輕鏈的帶型。而家鴨和鴿子在蛋白Marker31KD的條帶以下，都只存在一個(gè)條帶，至于究竟是IgG還是IgM的輕鏈，以下的Dot-ELISA實(shí)驗(yàn)證實(shí)其應(yīng)為IgG類抗體輕鏈的帶型。另外，電泳圖譜還表明，四種家禽血清免疫復(fù)合物的電泳條帶有一定差異，而同屬雞形目的家雞和烏雞之間條帶差異較小。 進(jìn)一步用Dot-ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)家禽血清免疫復(fù)合物，在Dot-EL

4、ISA實(shí)驗(yàn)中，確定了最適包被時(shí)間為60min，最適酶標(biāo)抗抗體工作濃度為1∶500。家雞血清免疫復(fù)合物中的抗體效價(jià)為1∶1024，烏雞的為1∶256。由Dot-ELISA的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，四種家禽2％PEG和3.5％PEG沉淀樣品均能與HRP—兔抗雞IgG發(fā)生特異性反應(yīng)，說明2％PEG和3.5％PEG確能沉淀血清免疫復(fù)合物。同時(shí)也證明家鴨和鴿子血清免疫復(fù)合物中的抗體成分應(yīng)為IgG。 綜上所述，本實(shí)驗(yàn)采用聚乙二醇(PEG)沉淀法提取家